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氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC）在細胞呼吸過程中接受氫以后，被還原為三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），在波長485nm處有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm測定其吸光值，即得土壤脫氫酶活性。

自備實驗儀器及用品

篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計、玻璃比色皿，冰、蒸餾水、甲醇（不允許快遞，請用戶自備）。

試劑的組成和配制

試劑一：粉劑×1瓶，使用前加10mL試劑二溶解，4℃避光保存（盡量現配現用）。

試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：甲醇，自備。

樣品處理

胞外酶：取1mL樣本，8000g 25℃離心10min，取上清液測定。

胞內酶: 取1mL樣本，8000g 25℃離心10min，棄上清，在沉淀中加入1mL蒸餾水，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），8000g 25℃離心10min，取上清液測定。

測定步驟和操作表

脫氫酶活力計算

標準曲線：y = 0.0422x - 0.0312；R2 = 0.9988；x為標準品濃度（μg/mL），y為吸光值。

（1）按樣本體積計算

酶活單位定義：在37℃時，每mL樣品每天催化產生1μgTF為一個酶活性單位。

sDHA（μg/ d /mL）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V反總÷V樣÷T=497.63×（△A+0.0312）

（2）按樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：在37℃時，每mg蛋白樣品每天催化產生1μgTF為一個酶活性單位。

sDHA（μg/ d / mg prot）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V反總÷V樣÷T÷Cpr = 497.63×（△A+0.0312）÷Cpr

V反總：反應總體積，2.1mL；T：培養(yǎng)時間，1d；V樣：樣本體積，0.1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL。

注意事項

配制好的試劑一避光保存于4℃，最好在一周內使用，若出現紅色，則不能使用。

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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