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氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC）在細胞呼吸過程中接受氫以后，被還原為三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），在波長485nm處有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm測定其吸光值，即得土壤脫氫酶活性。

自備實驗儀器及用品

篩子、天平、恒溫培養箱或水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計、玻璃比色皿，蒸餾水、甲醇（不允許快遞，請用戶自備）。

試劑的組成和配制

試劑一：粉劑×1瓶，使用前加10mL試劑二溶解，4℃避光保存（盡量現配現用）。

試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：甲醇，自備。

樣品處理

新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干，過30~50目篩。

測定步驟和操作表

脫氫酶活力計算

標準曲線：y = 0.0422x - 0.0312；R2 = 0.9988；x為標準品濃度（μg/mL），y為吸光值。

酶活單位定義：在37℃時，每克土壤樣品每天催化產生1μgTF為一個酶活性單位。

sDHA（μg/ d /g 土樣）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V反總÷W÷T= 47.39×（△A+0.0312）÷W

V反總：反應總體積，2mL；T：培養時間，1d；W：樣品質量，g

注意事項

配制好的試劑一避光保存于4℃，最好在一周內使用，若出現紅色，則不能使用。

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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