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1、血清（漿）中ATP的提取：按照血清（漿）體積（mL）：酸性提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議取約0.1mL血清（漿），加入1mL酸性提取液），進行冰浴勻漿，8000g 4 ℃離心10min；取上清液至另一EP管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測（不可用于蛋白質(zhì)含量測定）。

2、組織中ATP的提取：按照組織質(zhì)量（g）：酸性提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL酸性提取液），進行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清至另一EP管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測（不可用于蛋白質(zhì)含量測定）。

3、細胞或細菌中ATP的提取：先收集細胞或細菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：酸性提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL酸性提取液），超聲波破碎1min（冰浴，強度20％或200W，超聲2s，停1s），8000g?4?℃離心10min；取上清液至另一EP管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，8000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測（不可用于蛋白質(zhì)含量測定）。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長到700nm，蒸餾水調(diào)零。

2、顯色劑的配制：臨用前請根據(jù)擬用顯色劑體積（樣本數(shù)×0.87m L），按試劑四(mL)：試劑五（mL）=1：5的比例配制。用多少配多少。

3、樣本測定：

ATP含量計算：

1、血清（漿）中ATP含量計算

ATP含量(μmol/mL)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測定管－A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ×V1]÷(V3×V1÷V2)=20×(A測定管－A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

2、組織、細菌或細胞中ATP含量計算

（1）按蛋白濃度計算

ATP含量(μmol/mg prot)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測定管－A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ×V1]÷(V1÷Cpr）=1×(A測定管－A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷Cpr

蛋白質(zhì)含量需要另外測定。

（2）按樣本鮮重計算

ATP含量（μmol/g鮮重)=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測定管－A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ×V1]÷(W×V1÷V2)=2×(A測定管－A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

ATP含量(μmol/104 cell）=[C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測定管－A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管) ×V1]÷(500×V1÷V2)=0.004×(A測定管－A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)液濃度，1μmol/mL；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.03mL；V2：加入提取液體積，2mL；V3：加入血清（漿）體積：0.1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL； W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。

注意：最低檢測限為10nmol/mL或10nmol/g鮮重或0.1nmol/mg prot

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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