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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
維生素B1(Vitamin B1,VB1)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63503 |
維生素B1(Vitamin B1)是構成脫羧輔酶的主要成分,參與細胞代謝中的三羧酸循環,是維持機體正常代謝必須的水溶性維生素,在生物體能量代謝中有重要的作用。
測定原理
VB1在堿性條件下還原鐵氰化鉀生成亞鐵氰化鉀,亞鐵氰化鉀與Fe3+在弱酸條件下生成普魯士藍,在704nm有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、離心機、可見分光光度計、恒溫水浴鍋、1 mL玻璃比色皿、蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液:液體35mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體1mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體5mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體5mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體12mL×1瓶,4℃保存。
試劑五:液體6mL×1瓶,4℃避光保存。
樣本處理
1.組織:將樣品磨碎,按照質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入0.6mL提取液)加入提取液,60℃浸提30min,加蒸餾水0.4mL,混勻后于25℃,13000g離心10min,取上清測定(動物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心20-30分鐘)。
2.細胞:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入0.6mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);加蒸餾水0.4mL,混勻后于25℃,13000g離心10min,取上清測定。
3.血清:直接測定。
測定操作
計算公式
標準曲線:y = 0.017x+0.0031,R2 = 0.9991;x為標準品濃度:μg/mL;y為△A(A測定管-A空白管)
1. 按照蛋白含量計算
VB1含量(μg/mg prot)=(△A-0.0031)÷ 0.017÷Cpr
= 58.8×(△A-0.0031)÷ Cpr
2. 按照樣本質量計算
VB1含量(μg/g鮮重)=(△A-0.0031)÷ 0.017÷(W÷V樣總)
= 58.8×(△A-0.0031)÷ W
3. 按照細胞數量計算
VB1含量(μg/104 cell)=(△A-0.0031)÷ 0.017÷(細胞數量÷V樣總)
= 58.8×(△A-0.0031)÷ 細胞數量
4. 按照液體體積計算
VB1含量(μg/mL)=(△A-0.0031)÷ 0.017
= 58.8×(△A-0.0031)
V樣總:加入提取液體積,1mL; Cpr:蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g
注意事項
1.若測定結果中吸光值超過1,請將樣本稀釋后進行測定,并在計算公式中乘以稀釋倍數。
2.蛋白濃度較高的樣品,比如動物組織,若顯色完成后有沉淀產生,將樣本稀釋后再測定,在計算公式中乘以稀釋倍數。
3.顯色完成后立即進行測定。
4.標準曲線線性范圍為0.1-10μg/mL。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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