在線訂購 免費訂購熱線:021-59541103 021-60443211
聯系人:高小姐
電話:021-59541103 021-60443211
手機:13585831301
Q Q: 3004967995
Email:3004967995@qq.com
詳細地址:上海嘉定區嘉羅公路1661
產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)試劑盒(NBT法) | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63522 |
SOD(EC
測定原理:
通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子(O2-.),O2-.可還原氮藍四唑生成藍色甲臜,后者在560nm處有吸收;SOD可清除O2-.,從而抑制了甲臜的形成;反應液藍色越深,說明SOD活性愈低,反之活性越高。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制:
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體350μL×1支,4℃保存;
試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟:
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至560nm,蒸餾水調零。
2、將試劑二用蒸餾水稀釋兩倍,用多少配多少。(試劑二和蒸餾水1:1稀釋)
3、將一瓶試劑四用5mL蒸餾水溶解(溶解后一周內用完),再用蒸餾水稀釋4倍,用多少配多少(試劑四和蒸餾水1:3稀釋)。
4、測定前將試劑一、三和四在37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)水浴5min以上。
5、樣本測定(在EP管中依次加入下列試劑):
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μL試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
SOD活性計算:
1、抑制百分率的計算
抑制百分率=(A對照管-A測定管) ÷A對照管× 100%
盡量使樣本的抑制百分率在10-90%范圍內。如果計算出來的抑制百分率小于10%或大于90%,則通常需要調整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高,則需將樣本用提取液適當稀釋;如果測定出來的抑制百分率偏低,則需重新準備濃度比較高的待測樣本。
2、SOD酶活性單位:在上述黃嘌呤氧化酶藕聯反應體系中抑制百分率為50%時,反應體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位(U/mL)。
3、SOD酶活性計算:
(1)血清(漿)SOD活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總]÷V樣
=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)
(2)組織、細菌或培養細胞SOD活力計算:
a.按樣本蛋白濃度計算
SOD活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總]÷(V樣×Cpr)
=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷Cpr
需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。
b.按樣本鮮重計算
SOD活性(U/g 鮮重)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)
=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷W
c.按細菌或細胞個數計算
SOD活力(U/104 cell)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率) ×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)
=0.0228×抑制百分率÷(1-抑制百分率)
V反總:反應體系總體積,1.026mL;V樣:加入反應體系中樣本體積,0.09mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL ;W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500萬。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
留言注意事項:
1.遵守中華人民共和國有關法律、法規,尊重網上道德,承擔一切因您的行為而直接或間接引起的法律責任。
2.請您真實的反映產品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產品有任何疑問,也可以留言咨詢。
3.未經本站同意,任何人不得利用本留言簿發布個人或團體的具有廣告性質的信息或類似言論。
您感興趣的產品* | |
您的單位* | |
聯系人* | |
聯系電話* | |
詳細地址* | |
常用郵箱* | |
請輸入您對我們的意見或建議* | |
驗證碼* | |
產品訂購說明:
1、報價含普票、運費。
2、常用試劑備貨充足,除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發貨。
3、進口原裝產品要3-6周的貨期,詳細情況請咨詢客服。
4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。
5、如需代為檢測,標本對環境溫度高,可聯系客服安排專人取樣(限省內客戶)。
6、代測免收代測費,一周出結果。
7、產品因運輸途中包裝破損請拒絕簽收,做退回。我們將在24小時之內為您補發 損壞產品。
8、如因單位財務制度原因,可申請先發貨,報賬后付款(此條款僅限醫院、學校信譽良好客戶)。
普票匯款信息
賬 戶 名:上海生物
開 戶 行:中國銀行山東省分行營業部
賬 號:2169 2341 6278