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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63523 |
GOD(EC
測定原理
GOD催化產生H2O2,過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林偶聯酚,生成有色化合物,在500 nm有特征吸收峰,顏色深淺與GOD活性成線性關系。
試驗中所需的儀器和設備
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;
緩沖液:液體50mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入20mL緩沖液充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存一個月;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入20mL緩沖液充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存一個月;
樣品測定的準備
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至500nm,蒸餾水調零。
2、試劑一和試劑二的配制:參見試劑的組成和配制。
3、煮沸樣本的準備:取500μL樣本至新的EP管中,95℃水浴10min,冷卻至室溫后,8000g 4℃離心10min,取上清作為對照管的煮沸樣本待測。
4、測定操作表
GOD活力單位的計算
1、標準條件下測定回歸方程為y = 2.8348x - 0.0169;x為H2O2標準品濃度(μmol/mL),y為ΔA。
1、血清(漿)GOD活力的計算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷V樣÷T×1000=58.8×(ΔA+0.0169)
2、細菌、細胞或組織GOD活力的計算
(1)按蛋白濃度計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(V樣×Cpr) ×1000÷T
=58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位定義:每g組織每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/g鮮重)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=58.8×(ΔA+0.0169)÷W
(3)按細菌或細胞密度計算
單位定義:每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ×1000÷T
=0.118×(ΔA+0.0169)
V反總:反應體系總體積,0.625mL; V樣:加入樣本體積,0.25mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,15 min; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500萬。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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