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細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）或果汁樣本的處理：

按照血清（漿）或果汁體積（mL）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.1mL血清（漿）或果汁加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至525nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定（在EP管中依次加入下列試劑）

PPO活性計算：

1、血清（漿）或果汁PPO活性

單位的定義：每分鐘每mL血清（漿）或果汁在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化

0.01為一個酶活力單位。

PPO（U/mL）=ΔA×V反總÷(V液× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =60×ΔA÷V液

2、組織、細菌或細胞PPO活性

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位定義：每分鐘每mg組織蛋白在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個

酶活力單位。

PPO（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T =60×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。

（2）按樣本鮮重計算：

單位定義：每分鐘每g組織在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個

酶活力單位。

PPO（U/g 鮮重）=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =60×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位定義：每分鐘每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個酶活力單位。

PPO（U/104 cell）=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =0.12×ΔA

V反總：反應體系總體積，1.08mL；V液：加入血清（漿）或果汁體積，0.1mL；V樣：加入樣本體積，0.18mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，10 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500萬。

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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