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標(biāo)簽:多胺氧化酶(Polyamine oxidase PAO)試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
多胺氧化酶(Polyamine oxidase,PAO)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63514 |
多胺氧化酶是催化生物體內(nèi)多胺氧化的關(guān)鍵酶,通過(guò)調(diào)節(jié)體內(nèi)多胺水平和生成物的濃度,參與各種植物體對(duì)逆境脅迫的反應(yīng)和生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程。
測(cè)定原理:
PAO催化多胺氧化產(chǎn)生過(guò)氧化氫,在過(guò)氧化氫酶存在的條件下與底物顯色,在550nm下有特征吸收峰,通過(guò)測(cè)定吸光值增加速率來(lái)反映PAO活性。
需自備的儀器和用品:
分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體6mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:液體3mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體3mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心20min,取上清,置冰上待測(cè)。
2.細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
3.血清等液體:直接測(cè)定。
測(cè)定步驟:
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至550nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定
PAO活性計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A550變化0.002為一個(gè)酶活力單位。
PAO(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.002÷T =166.67×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A550變化0.002為一個(gè)酶活力單位。
PAO(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.002÷T =166.67×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A550變化0.002為一個(gè)酶活力單位。
PAO(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.002÷T =0.333×ΔA
(4)按液體體積計(jì)算
單位的定義:每mL液體樣本在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A550變化0.002為一個(gè)酶活力單位。
PAO(U/mL)=ΔA×V反總÷V樣÷0.002÷T =166.67×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,30 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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