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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
單寧酶(Tannase,TAN)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63516 |
單寧酶全稱是單寧酯酰水解酶(Tannase,EC
測定原理
使用抗氧化劑沒食子酸丙酯(PG)作為單寧酶酶促反應的底物,在270nn下測定底物PG反應前后的光密度變化,計算單寧酶酶活力。
需自備的的儀器和用品
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制
試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1支,4℃保存;臨用前每支加入3mL試劑一,充分溶解后備用;用不完的試劑4℃保存;
粗酶液提取
按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一),進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長到270 nm,蒸餾水調零。
2、加樣表
注意:
可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進行5min 95℃沸水浴處理。
TAN活力單位的計算
標準條件下測定回歸方程為y = 0.0058x + 0.0044,R2 = 0.9994;x為PG含量(μmol/L),y為吸光值。
1、按樣本體積計算
單位的定義:40℃下每毫升粗酶液每分鐘水解減少0.01μmol底物PG所需要的酶量定義為一個酶活單位。
TAN活性(μmol/min/mL)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反總÷0.01÷V樣÷T
=34.48×( ΔA-0.0044)
2、按照蛋白濃度計算
單位的定義:40℃下每毫克蛋白每分鐘水解減少0.01μmol底物PG所需要的酶量定義為一個酶活單位(U)。
TAN活性((μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反總÷0.01÷(V樣×Cpr)÷T
=34.48×(ΔA-0.0044)÷Cpr
3、按照樣本鮮重計算
單位的定義:40℃下每克樣品每分鐘水解減少0.01μmol底物PG所需要的酶量定義為一個酶活單位(U)。
TAN活性(μmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0044)÷0.0058÷1000×V反總÷0.01÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=34.48×(ΔA-0.0044)÷W
V反總:反應體系總體積,1mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,10min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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