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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
超氧陰離子(Oxygen free radical, OFR)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63519 |
生物體內超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導的作用,但積累過多時會對細胞膜及生物大分子產生破壞作用,導致機體細胞和組織代謝異常,從而引起多種疾病。
測定原理
超氧陰離子與鹽酸羥胺反應生成NO2-,NO2-在對氨基苯磺酸和α-萘胺的作用下,生成紅色的偶氮化合物,在530nm處有特征吸收峰,根據ΔA值可以計算樣品中O2-含量,反應式為NH2OH + 2O2- +H+ → NO2- + H2O2 + H2O。
自備實驗用品及儀器
天平、水浴鍋、離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、氯仿和蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體25mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體20mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體20mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:氯仿,自備。
超氧陰離子提取
1.植物、動物組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心20min,取上清置于冰上待測。。
2.細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心20min,取上清置于冰上待測。
3.血清或培養液:直接測定。
測定操作表
超氧陰離子含量計算公式
標準曲線:y = 0.0242x - 0.0027,R2=0.9980
1. 組織:
(1)按照樣本質量計算
超氧陰離子含量(nmol/g 鮮重)= (ΔA +0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×2
=148.76×(ΔA +0.0027)÷W
超氧陰離子產生速率(nmol/ g•min)=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T
=7.44× (ΔA +0.0027)÷W
(2)按照蛋白質濃度計算
超氧陰離子含量(nmol/mg prot)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣×Cpr)×2
=148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr
超氧陰離子產生速率(nmol/ mg prot•min)= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr
2. 細菌,真菌:
超氧陰離子含量(nmol/104 cell)= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量)×2
= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細胞數量
超氧陰離子產生速率(nmol/104 cell•min)= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細胞數量÷T
=7.44× (ΔA+0.0027)÷細胞數量
3. 血清或培養液
超氧陰離子 含量(nmol/mL)= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷V樣×2
=148.76× (ΔA+0.0027)
超氧陰離子產生速率(nmol/mL•min)= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T
= 7.44× (ΔA+0.0027)
V樣總:加入提取液體積,1 mL; V反總:反應總體積,0.9mL;V樣:反應中樣品體積,0.5mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量,g;T:反應時間,20min;2: 2分子O2-參與反應生成1分子NO2-。
注意事項
1、吸光值大于2,樣品適當稀釋再測定,注意計算公式里乘以稀釋倍數。
2、樣品制備好之后,立刻進行測定,請勿將樣品進行長時間的低溫保存,以免影響測定結果。
3、試劑四有一定的毒性,請操作時做好防護措施。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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