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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
葡萄糖含量試劑盒(測組織、細菌或細胞) | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63548 |
葡萄糖不僅是細胞能量代謝的主要底物,而且其代謝中間產物是生物合成的重要底物。植物可通過光合作用產生葡萄糖。就哺乳動物而言,葡萄糖不僅是大腦神經系統、肌肉、脂肪組織等的唯一能源,而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關。
測定原理:
葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產生過氧化氫;過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯酚,生成有色化合物,在505 nm有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽和蒸餾水
試劑的組成和配制:
試劑一:0.5μmol/mL葡萄糖溶液10mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體 25ml×1瓶,4℃保存;
試劑三:液體 25ml×1瓶,4℃保存;
葡萄糖提取:
1、組織的處理:按照組織質量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水),研磨成勻漿,95℃水浴10分鐘(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,8000g,25℃離心10min,取上清液備用。
2、細菌或細胞處理:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):蒸餾水體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL蒸餾水),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3S,間隔10S,重復30次),95℃水浴10分鐘(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,8000g,25℃離心10min,取上清液備用。
測定步驟:
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至505nm,蒸餾水調零。
2、混合試劑的配制:使用前將試劑二和試劑三1:1等體積混合,用多少配多少。
3、加樣表(在EP管中加入下列試劑):
葡萄糖含量計算:
1、按樣本蛋白濃度計算
葡萄糖含量(μmol/mg prot)=(C標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)=0.5×(A3-A1)÷
(A2-A1)÷Cpr。
2、按樣本鮮重計算
葡萄糖含量(μmol/g 鮮重)= (C標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=0.5×(A3-A1)÷
(A2-A1)÷W
3、按細菌或細胞密度計算
葡萄糖含量(μmol/ 104 cell)= (C標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)=0.001×(A3-A1)÷
(A2-A1)
C標準:標準管濃度,0.5μmol/mL;V1:加入樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1mL; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細菌或細胞總數,500萬。
注意:最低檢測限為50nmol/g鮮重或0.5nmol/mg prot
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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