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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
花青素還原酶(anthocyanidin reductase,ANR)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63536 |
花青素還原酶是黃酮合成途徑中的關鍵酶,在植物體內起非常重要的調控作用,對花青素還原酶的調控機制研究有利于從基因水平改變植物的品質。
測定原理
花青素還原酶在NADPH存在的條件下作用于飛燕草色素轉變為表沒食子兒茶素和NADP,使反應體系在340nm處的吸光值下降,吸光值下降速率反應了花青素還原酶的活性。
需自備的儀器和用品
天平、研缽、低溫離心機、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體40mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加3mL蒸餾水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加3mL蒸餾水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑四:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加3mL蒸餾水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
酶液提取
1.組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。10000g ,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2.培養液等液體:直接檢測。
測定操作表
酶活性計算公式
(1)按照蛋白濃度計算
酶活性定義:在40℃,pH6.5條件下,每毫克蛋白每分鐘催化1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。
ANR活性(nmol/min/mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 80.39×ΔA÷Cpr
(2)按照樣本質量計算
酶活性定義:在40℃,pH6.5條件下,每克組織每分鐘催化1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。
ANR活性(nmol/min/g 鮮重)= ΔA÷(ε×d)×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T
= 80.39×ΔA÷W
(3)按液體體積計算
酶活性定義:在40℃,pH6.5條件下,每毫升液體每分鐘催化1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。
ANR活性(nmol/min/mL)= ΔA÷(ε×d)×V反總÷V樣÷T
= 80.39×ΔA
V反總:反應體系總體積,1mL;ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,20min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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