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L-半乳糖苷-1,4-內酯脫氫酶(Gal LDH)測試盒

  • 產品貨號:CS-01S63533
  • 產品價格:電議
  • 產品產地:進口、國產
  • 包裝類型:100管/96樣
  • 采購熱度:545
  • 庫存:54
  • CAS號:
  • 方法:量法 可見分光光度法
  • 含量:
  • 品牌名稱:莼試
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  • 分子量:

簡介內容:類黃酮糖基轉移酶(UFGT)試劑盒質量可靠、價格優惠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點。

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標簽:類黃酮糖基轉移酶(UFGT)試劑盒 

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產品名稱

檢測方法

規格

貨號

類黃酮糖基轉移酶(UFGT)試劑盒

HPLC

50/48

CS-0163533

 注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:

類黃酮是植物次生代謝產物,糖基化是類黃酮基本結構形成的最主要的修飾反應之一,提高了類黃酮苷元的化學穩定性,這一過程主要由類黃酮糖基轉移酶催化的,使類黃酮-OHUDPG反應,是黃酮合成途徑中的關鍵酶。

商品介紹:

測定原理

類黃酮糖基轉移酶催化花青素與尿苷二磷酸葡萄糖反應產生花青苷,主要以矢車菊素3-葡萄糖苷(C3G)形式存在,用HPLC檢測產物可反映類黃酮糖基轉移酶的酶活性。

自備實驗用品及儀器

天平、研砵、離心機、恒溫水浴鍋、100目篩、高校液相色譜、針頭過濾器(水系、0.22μm)、濾膜(水系、0.45μm)、耐水C18柱(4.6×250mm)、樣品瓶、甲酸、甲醇(色譜級)、超純水

試劑組成和配制

提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加全部試劑三溶解。

試劑二:液體5mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體8mL×1瓶,4℃保存。

標準品:標準品×1支,-20℃保存。

樣本處理

組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)12~5的比例(建議稱取約0.5g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

實驗前的準備工作

1、檢測產物制備

2、將500 mL超純水和500 mL甲醇用0.45 μm的濾膜抽濾,以除去溶劑中的雜質,防止堵塞色譜柱。(注:蒸餾水用水系濾膜抽濾,甲醇用有機系濾膜抽濾)。

3、流動相的配制:流動相A1.6%甲酸水溶液; 流動相B1.6%甲酸甲醇溶液。

4、將配好的流動相超聲30分鐘,以脫去溶劑中的氣泡,防止堵塞色譜柱。

5、標準品的配制:

在標準品中加入1mL甲醇,配成5μmol /mL 母液,將母液用甲醇分別稀釋成2μmol/mL 1μmol/mL 0.5μmol/mL 0.25μmol/mL0.125μmol/mL的標準品溶液。針頭式過濾器過濾后待測。

測定操作步驟

1. 開啟電腦、檢測器和泵,安裝上色譜柱,打開軟件,在方法組中設置進樣量10 μL,梯度洗脫為0~5min85%A+15%B; 5~10min85%A+15%B; 10~30min80%A+20%B; 30~30.1min 60%A+40%B; 30.1~40min0%A+100%B。流速1mL/min,柱溫30℃,走樣時間為50min,檢測波長530nm,設置完畢保存方法組。

2.初始設置流動相A=85%,流動相B=15%,流速1 mL/min,待基線穩定后開始加樣。

3.加入標準品10 μL,在50min內可分離C3GC3G的保留時間在25min左右,(柱子不同,保留時間有差異),計算不同濃度的C3G標準品的峰面積。

4. 加入樣品10 μL,在相應保留時間處檢測C3G的峰面積。

酶活計算:

1.以標準品濃度(μmol/mL)為橫坐標,峰面積為縱坐標計算C3G標準曲線。將樣品峰面積代入標準曲線,計算樣品C3G含量。

2.酶活單位定義:

A.每毫克組織蛋白每分鐘催化反應產生1μmolC3G定義為一個酶活單位。

UFGT活性(μmol/min/mg prot= C×V反總÷(V樣×Cpr)÷ T

=0.117×C÷Cpr

B.每克組織每分鐘催化反應產生1μmolC3G定義為一個酶活單位。

UFGT活性(μmol/min/g 鮮重)= C×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷ T

=0.117×C÷W

CC3G濃度,μmol/mL V反總:反應總體積,0.35mLV樣:加入樣本量,0.1mLV樣總:加入提取液體積,1mLCpr:蛋白含量,mg/mLW:樣本質量,gT:反應時間,min

注意事項:

1、流速由小到大調節,避免柱壓過大。

2、使用完畢時,先用50%的甲醇水溶液洗色譜柱45min,再用純甲醇沖洗色譜柱30min

3、標準品的稀釋倍數要根據樣品中C3G濃度確定,樣品中C3G的峰面積必須落在不同濃度的C3G標準品的峰面積之內,該標準品稀釋倍數只是一個參考。

注意:
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者:上海莼試生物技術有限公司

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1、報價含普票、運費。

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3、進口原裝產品要3-6周的貨期,詳細情況請咨詢客服。

  

4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

  

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