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產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
蔗糖磷酸合成酶(Sucrose phosphate synthase,SPS)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63544 |
蔗糖不僅是重要的光合產物,也是植物體內運輸的主要物質,還是碳水化合物的貯存形式之一。SPS(EC
測定原理
蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,蔗糖磷酸與間苯二酚反應可呈現顏色變化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小與顏色的深淺成正比。
需自備的的儀器和用品
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體4mL×1瓶,-20℃保存;
試劑二:1000μg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:液體3mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體40mL×1瓶,4℃保存;
試劑五:液體12mL×1瓶,4℃避光保存;
樣品測定的準備
按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟
SPS活力單位的計算
1、按照蛋白濃度計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。
SPS活性(μg /min/mg prot)= C標準管×V1×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr
2、按照樣本鮮重計算
單位定義:每g組織每分鐘催化產生1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。
SPS活性(μg /min /g鮮重) = C標準管×V1×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷W
C標準管:標準管濃度,1000μg/mL;V1:加入反應體系中樣本體積,0.03mL; V2:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;T :反應時間:10min。
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
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