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本試劑盒采用3.5－二硝基水楊酸法測(cè)定蔗糖酶催化產(chǎn)生的還原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5－二硝基水楊酸與還原糖共熱被還原成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量和反應(yīng)液的顏色深度成正比。此法操作簡(jiǎn)便、迅速、雜質(zhì)干擾較小。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、沸水浴、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體2.5mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1支，4℃保存，用時(shí)加入1.5mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑4℃保存；

試劑三：液體5mL×1瓶，常溫保存；

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

加樣表和測(cè)定步驟：

蔗糖酶活力計(jì)算：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.1296x -0.12；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。

2、按照蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化水解1μg蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。

蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(V1×Cpr)÷T=771×(ΔA +0.12)÷Cpr。

3、按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每g組織每分鐘催化水解1μg蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。

蔗糖酶活力(μg/min/g鮮重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=771×(ΔA +0.12) ÷W。

1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，10min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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