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標(biāo)簽:桑葚超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase SOD）試劑盒
聯(lián)系人:高小姐
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| 產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 桑葚超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01Ｓ63530 |
SOD（EC
測定原理：
通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-.)，O2-.可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜，后者在560nm處有吸收；SOD可清除O2-.，從而抑制了甲臜的形成；反應(yīng)液藍(lán)色越深，說明SOD活性愈低，反之活性越高。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制：
試劑一：15mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×5瓶，4℃保存，用時每支加5.4mL蒸餾水，充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用；（該試劑為過飽和試劑，充分混勻后仍出現(xiàn)顆粒物不溶物不影響使用）
試劑三：液體350μL×1支，4℃保存；
試劑四：液體10mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至560nm，蒸餾水調(diào)零。
2、測定前將試劑一、二和四37℃（哺乳動物）25℃（其他物種）水浴5min以上。
3、樣本測定（在EP管中依次加入下列試劑）：
注意事項：
1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑三用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μL試劑三原液+60μL蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑三沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時間不夠，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
SOD活性計算：
1、抑制百分率的計算
抑制百分率＝(A對照管－A測定管) ÷A對照管× 100%
盡量使樣本的抑制百分率在10-90%范圍內(nèi)。如果計算出來的抑制百分率小于10%或大于90%，則通常需要調(diào)整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需將樣本用蒸餾水適當(dāng)稀釋；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度比較高的待測樣本。
2、SOD酶活性單位：在上述黃嘌呤氧化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50%時，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位(U/mL)。
3、SOD酶活性計算：
a.按樣本蛋白濃度計算
SOD活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V反總]÷(V樣×Cpr)×樣本稀釋倍數(shù)=11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷Cpr×樣本稀釋倍數(shù)
需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
b.按樣本鮮重計算
SOD活性(U/g 鮮重)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)×樣本稀釋倍數(shù)=11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷W×樣本稀釋倍數(shù)
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.026mL；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.09mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL ；W：樣本質(zhì)量，g。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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