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苯胺-4-羥化酶（AH）活性測定試劑盒微量法100管/48樣

  • 產品貨號：CS-01Ｓ63565
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：進口、國產
  • 包裝類型:100管/48樣
  • 采購熱度：656
  • 庫存：38
  • CAS號：
  • 方法：微量法
  • 含量：
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內容：苯胺-4-羥化酶（AH）活性測定試劑盒質量可靠、價格優惠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點。

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標簽:苯胺-4-羥化酶（AH）活性測定試劑盒 

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產品名稱

檢測方法

規格

貨號

苯胺-4-羥化酶（AH）活性測定試劑盒

微量法

100管/48樣

CS-01Ｓ63565
 注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
細胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶，在外源物質代謝中具有重要作用，尤其是藥物和毒物的代謝。AH在P450酶系中相當于CYP2E1亞型，CYP2E1不僅參與了藥物的代謝，而且還能催化多種前致癌物和前毒物的活化過程。
商品介紹：

測定原理：

AH催化苯胺羥化后產生的4-氨基酚，進一步轉變為酚-吲哚復合物，在630nm處有特征吸收峰；通過測定630nm吸光度增加速率，來計算AH活性。

自備儀器及用品：

普通離心機、超速離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、雙蒸水和冰。

試劑組成和配制：

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入100mL蒸餾水，充分溶解。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入10mL蒸餾水，充分溶解。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5mL蒸餾水，充分溶解。

試劑五：液體×1瓶，4℃保存。

試劑六：粉劑×1瓶（腐蝕性試劑），4℃避光保存。臨用前加入10mL蒸餾水，充分溶解。

試劑七：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入10mL蒸餾水充分溶解。

標準液：液體×1瓶，10μmol/L，4℃避光保存。

粗酶液提取：

1、除去細胞核，線粒體等大分子物質：稱約0.5g組織，加入1mL試劑一，冰上充分研磨，10 000g 4℃，離心30min，取上清液，轉移到超速離心管中。

2、粗制微粒體： 100 000g 4℃，離心60min，棄上清液。

3、除血紅蛋白等雜質：向步驟2的沉淀中加1mL試劑一，蓋緊后充分震蕩溶解，100 000g離心30min，棄上清液。

4、最終微粒體：向步驟3的沉淀中加試劑二0.5mL，蓋緊后充分震蕩溶解，即粗酶液，待測。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min，調節波長到630 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30min。

3. 試劑五置于冰浴預冷30min。

4. 標準管：取0.5 mL EP管，加入100μL標準液，100μL試劑六，100μL試劑七，混勻后室溫靜置30min，吸取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，630 nm測定光吸收，記為A標準管。

5. 對照管：取0.5 mL EP管，加入50μL粗酶液，100μL試劑三，50μL蒸餾水，混勻后37℃水浴中保溫30min；再加入100μL試劑五，混勻后冰浴5min，11000rpm，4℃，離心10min；取100μL上清液，加入新的0.5 mL EP管；再加入100μL試劑六，100μL試劑七，混勻后室溫靜置30min，吸取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，630 nm測定光吸收，記為A對照管。

6. 測定管：取0.5 mL EP管，加入50μL粗酶液，100μL試劑三，50μL試劑四，混勻后37℃水浴中保溫30min；再加入100μL試劑五，混勻后冰浴5min，11000rpm，4℃，離心10min；取100μL上清液，加入新的0.5 mL EP管；再加入100μL試劑六，100μL試劑七，混勻后室溫靜置30min，吸取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，630 nm測定光吸收，記為A測定管。

AH活性計算公式：

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1）按蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產生1nmol 4-氨基酚為1個酶活單位。

AH活性(nmol/min/mg prot) = C標準品×V標準品×（A測定管－A對照管）÷A標準管×稀釋倍數÷（Cpr×V樣）÷T

= 2×（A測定管－A對照管）÷A標準管÷Cpr。

（2）按樣本質量計算

活性單位定義：37℃中每克樣本每分鐘催化產生1nmol 4-氨基酚為1個酶活單位。

AH活性(nmol/min/g 鮮重)= C標準品×V標準品×（A測定管－A對照管）÷A標準管×稀釋倍數÷(W×V樣)÷T

= 2×（A測定管－A對照管）÷A標準管÷W

C標準品：10μmol/L；V標準品：100μL=1×10-4L；稀釋倍數： V反總÷V上清液=300μL÷100μL=3；Cpr：粗酶液蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒；W ：樣品質量；V樣：加入反應體系中粗酶液體積， 50μL=0.05 mL； T：催化反應時間（min），30min。

b.使用96孔板測定的計算公式如下

（1）按蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產生1nmol 4-氨基酚為1個酶活單位。

AH活性(nmol/min/mg prot) = C標準品×V標準品×（A測定管－A對照管）÷A標準管×稀釋倍數÷（Cpr×V樣）÷T

= 2×（A測定管－A對照管）÷A標準管÷Cpr

（2）按樣本質量計算

活性單位定義：37℃中每克樣本每分鐘催化產生1nmol 4-氨基酚為1個酶活單位。

AH活性(nmol/min/g 鮮重) = C標準品×V標準品×（A測定管－A對照管）÷A標準管×稀釋倍數÷(W×V樣)÷T

= 2×（A測定管－A對照管）÷A標準管÷W

C標準品：10μmol/L；V標準品：100μL=1×10-4L；稀釋倍數：V反總÷V上清液=300μL÷100μL=3；Cpr：粗酶液蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒； W ：樣品質量； V樣：加入反應體系中粗酶液體積， 50μL=0.05 mL； T：催化反應時間（min），30min。

注意：
1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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訂貨流程

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1、報價含普票、運費。

 

2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發貨。

  

3、進口原裝產品要3-6周的貨期，詳細情況請咨詢客服。

  

4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

  

5、如需代為檢測，標本對環境溫度高，可聯系客服安排專人取樣（限省內客戶）。

  

6、代測免收代測費，一周出結果。

7、產品因運輸途中包裝破損請拒絕簽收，做退回。我們將在24小時之內為您補發 損壞產品。

8、如因單位財務制度原因，可申請先發貨，報賬后付款（此條款僅限醫院、學校信譽良好客戶）。

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賬 戶 名：上海生物

 

開 戶 行：中國銀行山東省分行營業部

  

賬 號：2169 2341 6278

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