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標(biāo)簽:脂肪酶（Lipase LPS）活性試劑盒
聯(lián)系人:高小姐
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| 產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 脂肪酶（Lipase，LPS）活性試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01Ｓ63560 |
LPS又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中LPS的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。
測定原理：
LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測定脂肪酸生成速率，即可計算LPS活性。
自備儀器和用品：
研缽、臺式離心機、震蕩混勻器、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、甲苯100mL、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體90mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體14mL×1瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。
試劑三：甲苯100mL×1瓶，4℃保存（自備）。
試劑四：液體20mL×1瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體10μL×1瓶，10 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。臨用前加入3.168 mL甲苯，充分溶解。
粗酶液提取：
1.組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。12000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2.細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后12000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
3.血清等液體: 直接檢測。
LPS測定操作：
1.分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長到710 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一和試劑二置于37℃水浴預(yù)熱30min以上。
2.在5mL EP管中依次加入下列試劑
LPS活性計算公式：
1. 組織、細菌或細胞LPS活性
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol/min/mg prot) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（Cpr×V樣）÷T
=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷W
（3）按照細菌或者細胞數(shù)量計算
活性單位定義：37℃中每104個細胞每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol /min/104cell) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（細胞數(shù)量×V樣÷V樣總）÷T
=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷細胞數(shù)量
2. 血清等液體LPS活性
活性單位定義：37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol /min/mL) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷V樣÷T
=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]
C標(biāo)準(zhǔn)品：10 μmol/mL；V反總：反應(yīng)總體積，2mL；V樣：反應(yīng)中加入樣本體積，0.125mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時間，10 min。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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