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標(biāo)簽:脂蛋白酯酶(Lipoprotein lipase LPL)試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
脂蛋白酯酶(Lipoprotein lipase,LPL)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63551 |
脂蛋白酯酶是脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、乳腺細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成的一種酶,可催化甘油三脂水解為脂肪酸和單酸甘油酯,以供組織氧化供能和貯存,并在不同的組織表現(xiàn)出不同的生理意義。
測(cè)定原理
脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕櫚酸酯產(chǎn)生4-硝基苯酚,在400nm有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、冷凍離心機(jī)、研缽、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿。
試劑組成和配制
試劑一:液體60mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體25mL×1瓶,4℃保存。
樣品處理
1.組織:按照質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL試劑一)加入試劑一,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清待測(cè)。
2.細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一)加入試劑一,冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后于4℃,10000g離心10min,取上清待測(cè)。
3.血清:直接測(cè)定。
測(cè)定操作
計(jì)算公式
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y= 0.0581x -0.0169,R2=0.9982
1.按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義:在45℃,pH7.5條件下,每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL活性(μmol /min/mg prot)= (△A+0.0169)÷ 0.0581×V反總÷(V樣×Cpr)÷T
= 17.21×(△A+0.0169)÷Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義:在45℃,pH7.5條件下,每克組織每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL活性(μmol /min /g 鮮重)=(△A+0.0169)÷0.0581×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T
= 17.21×(△A+0.0169)÷W
3.按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義:在45℃,pH7.5條件下,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL活性(μmol /min /104 cell)= (△A+0.0169)÷0.0581×V反總÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總)÷T
= 17.21×(△A+0.0169)÷細(xì)胞數(shù)量
4.按照液體體積計(jì)算
酶活性定義:在45℃,pH7.5條件下,每毫升血清每分鐘水解產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚為一個(gè)酶活力單位。
LPL活性(μmol /min /mL)=(△A+0.0169)÷0.0581×V反總÷V樣÷T
= 17.21×(△A+0.0169)
V反總:反應(yīng)總體積,1mL;V樣:反應(yīng)體系中加入樣本體積,0.1mL;W:樣本質(zhì)量,g;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,10min
注意事項(xiàng)
1.試劑三加入混勻后靜置兩分鐘立即測(cè)定,否則影響吸光值。
2.吸光值過(guò)高或者測(cè)定結(jié)果不穩(wěn)定,則將酶液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂,并在?jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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