產品及特點:
香附LAMP鑒定試劑盒是放線菌的一種,常常會在耳部等引起感染,感染具有多發性、復發性等特點,難以完全治愈,對人體健康造成較長時間的損害,因此檢測香附LAMP鑒定試劑盒具有重要的意義。本試劑盒根據熒光定量PCR 原理開發,它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。
2. 特異性高,引物是根據香附LAMP鑒定試劑盒高度保守區設計,不會擴增其他細菌。
3. 引物和擴增體系經過優化,靈敏性比常規 PCR 高 100 倍。
4. 提供無傳染性的 PCR 陽性對照,便于區分假陰性樣品。
5. 一管式操作,熒光 PCR 檢測,不容易產生環境污染。
6. 本產品只能用于科研,本試劑盒足夠 50 次 20μL 體系的 PCR。
產品名稱 | 香附LAMP鑒定試劑盒 |
英文名稱 | Rhizoma cyperi |
規格 | 50次 |
貨號 | CSP915256 |
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
使用方法:香附LAMP鑒定試劑盒一、制備標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(其濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9. 如果進行定量分析,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照,6 個用于標準曲線樣品。如果做定性分析,則 6 個標準曲線樣品只選一個做(可以選 4 號,其余樣品不變)。
數據處理 11. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。
12. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等于 30。陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該小于或等于 25。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 30 則為陰性,如果小于或等于 25 則為陽性。如果在 25-30 之間,則重復一次。重復實驗的 Ct值如果大于或等于 30 則為陰性,如果小于 30,則為陽性
原創作者:上海莼試生物技術有限公司
在線咨詢
留言注意事項:
1.遵守中華人民共和國有關法律、法規,尊重網上道德,承擔一切因您的行為而直接或間接引起的法律責任。
2.請您真實的反映產品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產品有任何疑問,也可以留言咨詢。
3.未經本站同意,任何人不得利用本留言簿發布個人或團體的具有廣告性質的信息或類似言論。
同類產品