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技術(shù)服務(wù)

人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)

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中文名稱：ECM Kit(兔IgG)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：1盒

發(fā)貨周期：1～3天

用途：適于一抗為兔IgG的Western Blotting 檢測(cè)。

保存條件：4℃可保存一年。

實(shí)驗(yàn)操作步驟：

1．蛋白質(zhì)的樣品制備：

1)細(xì)胞培養(yǎng)蛋白質(zhì)樣品的制備：

1：胰酶消化后裂解：細(xì)胞培養(yǎng)至 80%左右密度時(shí)，以含 0.25%胰蛋白酶消化,室溫，低速離心，棄上清。細(xì)胞經(jīng)預(yù)冷的PBS 漂洗3次，加入 0.1-1ml 裂解液(根據(jù)細(xì)胞數(shù)量定)反復(fù)吹打。

2：皿上直接裂解：細(xì)胞培養(yǎng)至 80%左右密度時(shí)，細(xì)胞經(jīng)預(yù)冷的PBS 漂洗3次，加入 0.1-1ml 裂解液(根據(jù)細(xì)胞數(shù)量定)，用細(xì)胞刮刀收集，轉(zhuǎn)移至離心管中，反復(fù)吹打。

2)組織樣品的制備：新鮮組織塊迅速置于預(yù)冷的生理鹽水中，漂洗數(shù)次，按組織凈重：裂解液=1：10的比例，加入相應(yīng)體積的裂解液進(jìn)行勻漿，離心收集上清(如有粘稠物可超聲處理)

3)蛋白變性：處理后的樣品加入樣品緩沖液(按樣品濃度 1：1或1：2的比例)混勻，樣品置 1000C的水浴箱加熱 3-5分鐘，10000g 離心 10分鐘，取上清液。(樣品可立即使用也可以分裝凍存，-20℃可穩(wěn)定保持?jǐn)?shù)月。)

2．SDS-PAGE 電泳：

1)．制膠：①按比例配制分離膠(丙烯酰胺母液：?jiǎn)误w：雙體=29：1)，緩緩地?fù)u動(dòng)溶液，使激活劑混合均勻，將凝膠溶液平緩地注入兩層玻璃極中，再在液面上小心注入一層水或正丁醇，以阻止氧氣進(jìn)入凝膠溶液中，37℃恒溫箱中靜置 60min。

②同前按比例配制濃縮膠，但混勻溶液時(shí)不要過(guò)于劇烈以免引入過(guò)多的氧氣。吸去不連續(xù)系統(tǒng)中下層分離膠上的水分，以連續(xù)平穩(wěn)的液流注入凝膠溶液，然后小心插入梳子并注意不得在齒尖留有氣泡，37℃恒溫箱中靜置60min 以上以保證完全聚合。

2)加樣：依次加入標(biāo)準(zhǔn)品和待分析樣品。(加樣時(shí)間要盡量短，以免樣品擴(kuò)散，可在未加樣的孔中加入等量的樣品緩沖液避免邊緣效應(yīng)。樣品一般在 1.0mm 厚6、顯色(ECM)ECM 顯色劑配制:按 1ml 蒸餾水，加顯色劑 A、B 各 1 滴混勻。將雜交后印跡膜放入顯色盒中,加上混合好的顯色液反應(yīng)約 1-5分鐘。吸去印跡膜邊緣顯色液,將一透明的玻璃紙蓋住撫平,以確保×感光膠片的干燥。印跡膜轉(zhuǎn)入暗室中使膠片曝光 30＇-5分鐘。

7、顯影，定影。將曝光后的×感光膠片放入顯影液中沖洗至膠片上出現(xiàn)條帶或者膠片透明為止,再放入定影液中定影，膠片可長(zhǎng)期保存。

ECM Kit(兔IgG)細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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