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在病理實驗制作切片時，我們會經(jīng)常碰到一些含鈣組織，而且鈣十分堅硬。由于組織中的鈣和石蠟之間的密度不同，含鈣的組織一般不能直接制作切片。骨組織含鈣量最多。除了骨組織之外其它組織也可發(fā)生鈣化，在組織中形成鈣化區(qū)，所以需要經(jīng)過脫鈣過程。脫鈣是制作骨組織切片的重要環(huán)節(jié)，尤其是要進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色的骨組織。

乙二胺四乙酸(EDTA)與羥基磷灰石結(jié)晶的外層鈣結(jié)合，形成可溶性的非離子化合物，同時又促進(jìn)晶體內(nèi)層的結(jié)合鈣向外轉(zhuǎn)移。借助這種連續(xù)性的作用使羥基磷灰石晶體逐漸融解，pH中性時可起螯合作用。其特點是脫鈣時間長，對骨組織的損傷少，酶活性(堿性磷酸酶)和細(xì)胞抗原性保存較好，制作的切片可用于組織化學(xué)和免疫組化分析。

主要用途：

用于骨組織、牙齒等脫鈣。

使用說明：

1．將骨組織截成0.5cm×0.3cm×0.2cm大小骨片，生理鹽水清洗后立即投入冷凍的固定液中，4℃固定 12 h~24 h；固定結(jié)束后骨片在0.2mol磷酸緩沖液中充分漂洗。

2．漂洗后投入脫鈣液中，室溫下脫鈣，每日檢查脫鈣情況，直至骨片脫鈣完全為止。脫鈣結(jié)束后，骨片用蒸餾水沖洗20min，脫鈣液每隔4-5天更換一次新液，經(jīng)過 3次更換新液后，此后每天更換新液，但請根據(jù)具體實驗具體分析。以大頭針能刺進(jìn)骨密質(zhì)為完成脫鈣標(biāo)準(zhǔn)。

3．然后進(jìn)入常規(guī)脫水處理程序并包埋、切片。

注意事項：

1.為使脫鈣更為充分，每次最好更換新液，這既棄去了脫掉的鈣鹽，增加脫鈣強(qiáng)度，又起到降低脫鈣溫度的作用。

2.脫鈣時間以脫鈣完成為標(biāo)準(zhǔn)：以大頭針能輕易刺進(jìn)骨密質(zhì)為準(zhǔn)。

3.脫鈣溫度不要太高，一般以室溫(25℃)為宜，高溫可加快脫鈣速度，但可破壞組織中的核酸而影響染色效果。低溫(4℃)則會減慢脫鈣速度，使組織在脫鈣液中浸泡過久而引起損傷。

4.為了提高 EDTA的脫鈣速度，骨組織取材盡量取薄。

5.為了提高 EDTA的脫鈣速度，也可以采用微波脫鈣。用微波爐輔助脫鈣可以大大縮短脫鈣時間，以微波間歇脫鈣，每次輻射1分鐘，每次輻射之間都將燒杯移至室溫，冷卻 5分鐘，以保證每次的微波輻射脫鈣液的溫度不至于太高(70℃)。脫鈣時脫鈣液溫度過高，易導(dǎo)致假陰性，背景色深等缺點。因此，在時間要求不緊迫的前提下，該方法也不應(yīng)是首選。

6.為達(dá)到骨組織既充分脫鈣，又保護(hù)骨組織的抗原不受破壞，需要對含鈣的組織充分固定之后再進(jìn)行脫鈣。然后再行常規(guī)制片。

EDTA脫鈣液細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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