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5.需準(zhǔn)備 37℃水浴或溫箱、酶標(biāo)儀或普通分光光度計，測定波長為540-595nm 之間，562nm 最佳。酶標(biāo)儀需與 96 孔酶標(biāo)板配套使用。使用分光光度計測定蛋白濃度時，試劑盒測定的樣品數(shù)量會因此而減少。使用溫箱孵育時，應(yīng)注意防止因水分蒸發(fā)影響檢測結(jié)果。

6.使用 BCA 蛋白測定法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，因此需注意保持定時和定溫，以確保精確定量。

7.實驗操作規(guī)范，提高上樣量的精確度。

使用方法：

一．配制 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品

注：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液為蛋白樣品的溶解液，原則上蛋白樣品在什么溶液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS 進(jìn)行稀釋。

二.配制 BCA 工作液

A.計算所需要的總 BCA 工作液體積。

總 BCA 工作液體積=(標(biāo)準(zhǔn)品+待測樣品)×重復(fù)數(shù)×每個樣品所需要的BCA 工作液

注意：試管法檢測時每個樣品加 2.0ml BCA 工作液，微孔板檢測每個樣品加 200μl BCA 工作液。

B.配制 BCA 工作液：50 體積的BCA 試劑 A 中加入 1 體積的BCA 試劑 B(A:B=50:1)，充分混勻。

注意：BCA 試劑 B 加入 BCA 試劑 A 中后，迅速渾濁，通過混勻后立即變澄清。BCA 工作液裝入密封容器內(nèi)，室溫條件 24h 穩(wěn)定。

三.試管法(樣品：BCA 工作液=1:20)

1.各取 100μl 標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品加入到反應(yīng)管中。

2.每管加入 2.0ml BCA 工作液，混勻。37℃孵育30min。

注意：也可室溫孵育2h，或者 60℃孵育30min。BCA 檢測蛋白濃度，延長孵育時間會加深顏色反應(yīng)。升高溫度會加快顯色反應(yīng)。但是溫度升高和時間延長會降低檢測下限，以及降低工作線性范圍

BCA蛋白濃度測定試劑盒細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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