英文名稱:
產品規格:1盒
發貨周期:1~3天
產品規格:
Bradford 染色液 100ml
BSA 標準品 20ml(2mg/ml)
產品描述:應用試管法可以測量100管,微孔板法可以測量400孔
產品保存:4℃保存,一年有效。
產品說明:Bradford 蛋白濃度測定法是目前常用的靈敏度較高的蛋白濃度測定方法之一。它是根據 Bradford 染液(考馬斯亮藍 G-250 染料)與蛋白結合,使染料的最大吸收峰從 A456變為A595,且測定的吸光值與蛋白濃度成正比關系的原理設計的。本法通過吸光值,推算蛋白濃度,實現了蛋白濃度測定的快速性和簡便性。靈敏度高,比 Lowry 法大約高四倍,最低蛋白檢測量可達 1μg。測定速度快、簡單,僅需一種試劑即可,且不受大多數樣品中化學試劑的影響。
注意事項:
1.各取樣操作應準確無誤。
2.在100~1500μg/ml的濃度范圍線性最佳。
3.加入樣品后的試劑,混合均勻后,靜置反應,測量過程中切不要再次劇烈晃動。
4.Bradford 染色液使用前,應充分混勻。同時,酶標儀需預熱 20min。
5.Bradford 染色液需恢復到室溫再使用,有利于提高檢測的靈敏度。
6.每次試驗都必須建立標準曲線。另外,為了得到更精確的結果,每個蛋白梯度和樣品均需做復孔。
7.Bradford法測定蛋白濃度對大多數化學物質的兼容性比較好,比如對還原劑DTT的兼容性高達5mM。但會受到略高濃度的去垢劑影響,如,SDS需低于0.01%,Triton X-100低于0.05%,Tween 20/ 60/80低于0.015%等。(詳情見附錄)對于含去垢劑的樣品,建議使用BCA蛋白定量檢測試劑盒。
使用說明:
一、配制 BSA 標準品
標準品稀釋液為蛋白樣品的溶解液,原則上蛋白樣品在什么溶液中,標準品也宜用什么溶液稀釋。
但也可用 0.9%的NaCl或1×PBS 進行稀釋。
二、檢測方法
A.試管法檢測(線性范圍:100-1500μg/ml)
1.各取20μl不同濃度標準品和待測樣品加入到反應管中;
2.加入1ml Bradford 染色液,混勻。室溫孵育10min。
3.分光光度計上測定 595nm 處的吸光度,用裝滿水的比色皿對儀器校零。之后測定所有樣本濃度。
4.根據 BSA 標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的OD 值即最終的讀數),繪制標準曲線(X-蛋白濃度μg/ml;Y-最終的OD595nm)。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
B.標準微孔板檢測(線性范圍:100-1500μg/ml)
1.各取 5μl 各濃度標準品和待測樣品加入到微孔板中;
2.每孔加入 250μl Bradford 染色液,振蕩 30s 充分混勻。蓋上微孔板,室溫孵育10min。
3.酶標儀上測定595nm處的吸光度。或者其他575~615nm波長范圍內的吸光度,但是相對于595nm,吸光度會存在~10%的損失。
4.根據 BSA 標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的OD 值即最終的讀數),繪制標準曲線(X-蛋白濃度μg/ml;Y-最終的OD595nm)。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
注意:由于酶標板的光徑比比色皿短,經酶標板檢測得到的OD595nm會低于比色皿檢測所得,因此可能降低本法的檢測下限。要得到更高的OD595nm,可使用 7-10μl 標準品/待檢樣本,和 250μlBradford 染色液來進行檢測。