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本試劑盒利用超氧化物可以還原WST-1產(chǎn)生可溶性有色物質(zhì)為基礎來檢測超氧化物。本試劑盒的檢測試劑中添加了Catalase(觸酶)等，可以清除過氧化氫等過氧化物對WST-1顯色的干擾，使測定結果更加準確。并且本試劑盒還提供SOD(超氧化物歧化酶)，可以驗證本試劑盒測定出的結果是否為超氧化物，以排除檢測體系中所用的一些試劑可能產(chǎn)生的干擾。對于本試劑盒，加入SOD后通常可以抑制90%以上的超氧化物。

WST-1是一種類似于MTT的化合物，可以被超氧化物還原生成橙色的formazan。超氧化物產(chǎn)生越多越快，則顏色越深，即相應測定得到的吸光度值越大。

使用WST-1作為檢測試劑比用傳統(tǒng)的細胞色素c(cytochrome c)檢測超氧化物具有多方面的優(yōu)點。首先，WST-1本身的吸光度非常低(通常OD450為0.02左右，因儀器和酶標板不同而有所不同)，而細胞色素c本身的吸光度非常高(通常OD550為0.5左右)，因此，使用WST-1與細胞色素c相比，檢測靈敏度高很多倍。其次，WST-1的還原產(chǎn)物是穩(wěn)定的可溶性產(chǎn)物，且對細胞基本無毒性，使WST-1方法更加適合于高通量的篩選。另外，細胞色素c法由于靈敏度的限制，一般不適合用96孔板測定，而WST-1法可以用96孔板測定，使檢測更加便捷。用WST-1法或細胞色素c法對超氧化物測定效果比較參考圖1。圖1中，50萬/毫升嗜中性粒細胞在37℃用PMA刺激指定時間，用WST-1或細胞色素c方法分別測定。WST-1法測定OD450，而細胞色素c法測定OD550。另外，WST-1法和luminol法相比，靈敏度相近，但僅須使用普通的酶標儀，無須使用luminol法所需的luminometer，并且檢測速度也比luminol法更加快捷。

試劑盒組分：

超氧化物檢測緩沖液————30ml

WST-1溶液—————————1ml

Catalase溶液———————200μl

SOD溶液——————————20μl

儲存條件：-20℃，有效期一年。

超氧化物檢測試劑盒細胞生物學研究有以下幾個方面。

細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調(diào)控。
⑤細胞分化及其調(diào)控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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