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試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中HSP60IgA表達。用純化的HSP60IgA抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中HSP60IgA相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的HSP60IgA抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中HSP60IgA的存在與否。

樣本要求：

1．HSP60IgA人抗體酶聯(lián)免疫試劑盒標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作程序：

操作步驟：

1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50%l。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40%l，然后再加待測樣品 10%l。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50%l，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50%l，再加入顯色劑 B50%l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50%l，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

注意事項：

1．HSP60IgA人抗體酶聯(lián)免疫試劑盒操作嚴(yán)格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 1530 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須注意安全。

保存條件及有效期：

1．HSP60IgA人抗體酶聯(lián)免疫試劑盒試劑盒保存：；28℃。

2．有效期：6 個月

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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