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DAPI是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料。和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。 DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。 DAPI的最大激發(fā)波長為340nm，最大發(fā)射波長為488nm；DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后，最大激發(fā)波長為364nm，最大發(fā)射波長為454nm。

操作步驟：

1、對于細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色，則先進(jìn)行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行DAPI染色。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行后續(xù)的DAPI染色。

2、對于貼壁細(xì)胞或組織切片，加入少量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細(xì)胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，混勻。

3、室溫放置3-5分鐘。

4、吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

5、直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)看到凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。

注意事項(xiàng)：

1、本DAPI染色液的濃度經(jīng)過優(yōu)化，確保可以滿足各種常規(guī)染色的需要。

2、熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。

3、為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4、DAPI對人體有一定刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。

儲(chǔ)存條件：-20℃避光，有效期12個(gè)月。

即用型DAPI染色液細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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