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Hoechst 33342，也稱bisBenzimide H 33342或HOE 33342，是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。Hoechst 33342染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst 33342也常用于普通的細胞核染色，或常規的DNA染色。Hoechst 33342的最大激發波長為346nm，最大發射波長為460nm;Hoechst 33342和雙鏈DNA結合后，最大激發波長為350nm，最大發射波長為461nm。本Hoechst 33342染色液為即用型，可直接用于固定細胞或組織的細胞核染色，也可直接用于活細胞或組織的細胞核染色。

使用說明：

使用前用生理鹽水或PBS將Hoechst 33342染色液稀釋100倍，即為工作液。

1. 對于固定的細胞或組織：

a. 對于細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。隨后如果需要進行免疫熒光染色，則先進行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續步驟進行Hoechst 33342染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行后續的Hoechst 33342染色。

b. 對于貼壁細胞或組織切片，加入少量Hoechst 33342工作液，覆蓋住樣品即可;對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品3倍體積的工作液，混勻。室溫放置3-5分鐘。

c. 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

d. 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細胞發生凋亡時，會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。

2. 對于活細胞或組織：

a. 加入適當量Hoechst 33342工作液，必須充分覆蓋住待染色的樣品，通常對于六孔板一個孔需加入1mL工作液，對于96孔板一個孔需加入100μL工作液。

b. 在適宜于細胞培養的溫度下培養20-30分鐘。棄染色液，用PBS或培養液洗滌2-3次即可進行熒光檢測。

注意事項：

熒光染料都存在淬滅的問題，為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光衰減封片劑。建議染色后盡量當天完成檢測，活細胞或組織染色后應立即觀察

合Hoechst 33342染色液 細胞生物學研究有以下幾個方面。

細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調控。
⑤細胞分化及其調控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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