產(chǎn)品目錄

3．WST-1 是 MTT的一種升級替代產(chǎn)品，和 MTT或其它 MTT 類似產(chǎn)品如 XTT、MTS 等相比有明顯的優(yōu)點。首先，MTT 被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而WST-1和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan 都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-1 產(chǎn)生的formazan 比 XTT和 MTS 產(chǎn)生的formazan 更易溶解。再次，WST-1 比 XTT和 MTS 更加穩(wěn)定，使實驗結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，WST-1和MTT、XTT 等相比，線性范圍更寬，靈敏度更高4．本試劑盒可以用于細胞因子等誘導(dǎo)的細胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導(dǎo)的細胞毒性檢測，或一些藥物誘導(dǎo)的細胞生長抑制檢測等。

5．本試劑盒檢測非常便捷。無須使用同位素，所有的檢測步驟僅在同一塊 96 孔板內(nèi)完成。

不必洗滌細胞，不必收集細胞，也不必采用額外步驟去溶解 formazan。可以用于大批量樣品的檢測。

6．酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。

7．WST-1 對細胞無明顯毒性。加入 WST-1 顯色后，可以在不同時間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板，使檢測時間更加靈活，便于找到最佳測定時間。

8．本試劑盒可以測定 100 個樣品。

使用方法：

1．WST-1溶液的配制：把1ml電子耦合試劑加入到WST-1粉末中，完全溶解即成WST-1溶液。WST-1溶液4℃避光可保存一周，而不影響使用效果。短期內(nèi)不使用的WST-1溶液，分裝后可以-20℃避光保存半年(盡量避免反復(fù)凍融)。凍存的WST-1溶液溶解后可能會觀察到一些沉淀物，這是正常現(xiàn)象，37℃水浴孵育2-10分鐘，通常可以完全溶解。

2．收集對數(shù)期細胞，調(diào)整細胞懸液濃度，每孔加入 100μl，鋪板使待測細胞調(diào)密度至1000-10000 孔，(邊緣孔用無菌 PBS 填充)。5%CO2，37℃孵育，至細胞單層鋪滿孔底(96孔平底板，具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定)。加入濃度梯度的藥物，原則上，細胞貼壁后即可加藥，或兩小時，或半天時間，每孔 0-10μl，設(shè) 3-5 個復(fù)孔.建議設(shè) 5 個。

3．每孔加入 10μl WST-1 溶液，繼續(xù)培養(yǎng) 4 小時。若藥物與 WST-1 能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用 PBS 沖 2-3 遍后，再加入含 WST-1的培養(yǎng)液。

4．在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育時間長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，初次實驗時可以在 0.5、1、2和 4 小時后分別用酶標(biāo)儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。

5．把 96 孔板置于搖床上搖動一分鐘，以充分混勻待檢測體系。

6．在 450nm 測定吸光度。如無 450nm 濾光片，可以使用 420-480nm的濾光片。可以使用大于 600nm的波長作為參考波長進行雙波長測定。

注意事項：

1．由于使用 96 孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面，由于 96 孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加 PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。

2．使用時最好帶那種透明的簿膜手套。

WST-1細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒 細胞生物學(xué)研究有以下幾個方面。

細胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調(diào)控。
⑤細胞分化及其調(diào)控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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