產(chǎn)品目錄

1．MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的實(shí)驗(yàn)方法。由于細(xì)胞活力與細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)，因此常常用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況。MTT可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成結(jié)晶狀的深紫色產(chǎn)物formazan。在特定溶劑存在的情況下，可以被完全溶解。然后通過(guò)酶標(biāo)儀可以測(cè)定 570nm 波長(zhǎng)附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。

2．本試劑盒采用了獨(dú)特的Formazan 溶解液配方，無(wú)需去除原有的培養(yǎng)液，可以直接加入Formazan 溶解液溶解formazan。從而避免了由于去除培養(yǎng)液時(shí)formazan 被部分去除而引起的誤差。

3．本試劑盒背景低，靈敏度高，線性范圍寬，使用方便提高了可靠性。

4．本產(chǎn)品為500次(5個(gè)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板)操作。

注意事項(xiàng)：

1．由于使用 96 孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果你的細(xì)胞要養(yǎng) 48 小時(shí)或更長(zhǎng)，建議不要吝嗇 96-孔板的四周邊孔，這 32 個(gè)邊孔不能使用，建議加入滅菌 PBS 以飽和中間 64 個(gè)孔的水分。因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，邊孔的水分蒸發(fā)很快，培養(yǎng)液及里面的藥物會(huì)出現(xiàn)濃縮現(xiàn)象，細(xì)胞的狀況就復(fù)雜了。2．MTT 溶劑在低溫情況下會(huì)凝固，使用前請(qǐng)室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

3．MTT 一般最好 4ºC 避光保存兩周內(nèi)有效，保存在-20℃長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融，最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解，當(dāng) MTT 變?yōu)榛揖G色時(shí)就表明 MTT 已失效。

4．Formazan 溶解液結(jié)凍或產(chǎn)生沉淀時(shí)可以 37℃水浴孵育以促進(jìn)溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。

5．孵育時(shí)，須避光。

6．MTT 有致癌性，用的時(shí)候小心,有條件最好帶那種透明的簿膜手套．MTT 需要無(wú)菌，MTT對(duì)菌很敏感。

使用方法：

1．收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔加入 100μl,細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入5000個(gè)細(xì)胞(96孔板，具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。加入濃度梯度的藥物，原則上，細(xì)胞貼壁后即可加藥，每孔0-10μl，設(shè)3-5個(gè)復(fù)孔。

2．5%CO2，37℃孵育16-48 小時(shí)，置顯微鏡下觀察。

3．每孔加入10微升MTT染色液，繼續(xù)培養(yǎng)4h。若藥物與 MTT 能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS洗2-3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。

4．每孔加入100微升Formanzan溶解液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)再繼續(xù)孵育。直至在普通光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn) formazan 全部溶解。通常 37℃孵育4小時(shí)左右，紫色結(jié)晶會(huì)全部溶解。

如果紫色結(jié)晶較小較少，溶解的時(shí)間會(huì)短一些。如果紫色結(jié)晶較大較多，溶解的時(shí)間會(huì)長(zhǎng)一些。(也可以每孔加入 100μl的DMSO，細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育10min左右，紫色結(jié)晶基本全部溶解，加入DMSO之前需去除細(xì)胞培養(yǎng)液)。

5．在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀570nm測(cè)定吸光度。如無(wú)570nm濾光片，可以使用560-600nm的濾光片。

MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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