保存條件：-20℃冰凍保存。
保存期：一年
工作原理：
在機體內部隨時都在發生著細胞的死亡。傳統上用顯微鏡來觀察細胞的死亡，其特征為核染色質的濃縮及碎片的形成。但是這種現象出現的很晚，時間也很短暫。凋亡的特征是內源性核酸內切酶被激活，細胞自身的染色質或DNA 被切割，出現單鏈或雙鏈缺口，并產生與DNA斷點數目相同的3’-OH 末端。末端脫氧核糖核酸轉移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以將地高辛標記的dUTP(DIG-dUTP)標記至3’-OH 末端，DIG-dUTP 結合在DNA斷點部位，可以通過生物素化抗地高辛抗體(Anti-DIG-Biotin)和 SABC-AP反應后，加入顯色底物 BCIP/NBT予以顯示。凋亡的細胞核呈紫藍色，從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細胞。
試劑盒內容：
1.標記緩沖液(Labeling Buffer)1ml
2.末端脫氧核糖核酸轉移酶(TdT,×20)20μl
3.DIG-dUTP(×20)20μl
4.封閉液(Blocking Reagent)4ml
5.生物素化抗地高辛抗體(×100)20μl
6..SABC-AP(×100)20μl
7.Proteinase K(×200)50μl
8.BCIP/NBT 顯色劑(×20)0.2ml
9.抗體稀釋液4ml
陽性對照片2張
用戶自備試劑：
1.多聚賴氨酸或APES。
2.0．01M TBS(pH7.5)(配法:1L 雙蒸餾水中加入8.5克氯化鈉,1.2 克Tris和0.45—0.5ml純乙酸)。
3.0.01M TBS(pH9.0--9.5)(配法:1L 雙蒸餾水中加入 8.5克氯化鈉,1.2克Tris)。
4.核固紅—復染用。
5.水溶性封片劑。
操作步驟：
1.樣品處理
(1)玻片預先用多聚賴氨酸或APES進行處理。
(2)細胞涂片和冰凍切片：最重要的是及時固定。用 4%多聚甲醛/0.01M PBS(pH7.0---7.6)室溫下固定 30—60分鐘。PBS洗2分鐘×2次。蒸餾水洗滌 2分鐘×2次。
(3)組織：應及時固定。常規 4%多聚甲醛/0.01M PBS(pH7.0---7.6)或10%中性緩沖福爾馬林固定 4 小時以上，石蠟包埋。切片常規脫蠟入水(脫蠟務必干凈)。
2.標本片加 0．01M TBS(pH7.5)1：200 新鮮稀釋 Proteinase K 37℃消化 1—15分鐘,TBS洗2分鐘×3次。(細胞涂片和冰凍切片一般不消化或僅消化 10—60 秒鐘。新鮮石蠟切片消化 5-10分鐘。陳舊石蠟切片消化 10-15分鐘)。
3.標本片加標記緩沖液(Labeling Buffer),20μl/片,以保持切片濕潤。然后按每張切片取 TdT和 DIG-d-UTP 各1μl，加入18μl標記緩沖液中，混勻，甩去切片上多余液體后加混合的標記液，20μl/片。置樣品于濕盒中，37℃標記2 小時。
4.0．01M TBS(pH7.5)洗2分鐘×3次。
5.加封閉液 50μl/片，室溫 30分鐘，甩掉封閉液，不洗。
6.用抗體稀釋液 1：100 稀釋生物素化抗地高辛抗體：(取1ml抗體稀釋液加生物素化抗地高辛抗體 10μl)，混勻后 50μl/片加至標本片上。置樣品于濕盒中，37℃反應 30-60分鐘。0.01M TBS(pH7.5)洗2分鐘×3次。
7.用抗體稀釋液 1：100 稀釋 SABC-AP：取1ml抗體稀釋液加 SABC-AP 10μl，混勻后50μl/片加至切片。37℃反應 60分鐘。0.01M TBS(pH7.5)洗5分鐘×4次。
8.BCIP/NBT 顯色：BCIP/NBT(×20)按 1：20的比例用 0.01M TBS(pH9.0-9.5)稀釋，混勻。顯色液加至標本上。避光顯色 20-30分鐘，若無背景出現則可繼續顯色。充分水洗。
9.必要時可用核固紅等復染。水溶性封片劑封片，也可簡單地用甘油封片。
鏡檢。
結果判定：
細胞核中有紫藍色顆粒者為陽性細胞，即凋亡的細胞。
13585831301
021-59541103 021-60443211
3004967995
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