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Hoechst 33342/PI 雙染試劑盒（Hoechst 33342/PI Double Stain Kit）采用Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）雙染的方法以區(qū)分凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的試劑盒。其檢測(cè)原理是：細(xì)胞核熒光染料Hoechst 33342可以穿透細(xì)胞膜，嵌入雙鏈DNA后釋放藍(lán)色熒光。對(duì)于正常細(xì)胞，其可少許進(jìn)入細(xì)胞膜使其染上低藍(lán)色。而凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)，從而使得進(jìn)入凋亡細(xì)胞內(nèi)的Hoechst 33342明顯多于正常細(xì)胞，熒光強(qiáng)度比正常細(xì)胞要高。另外，細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)染色質(zhì)會(huì)固縮，從而使得染料能更有效和聚集的結(jié)合于DNA，并且凋亡細(xì)胞膜上的p-糖蛋白泵功能受損而不能有效的將Hoechst 33342排除到細(xì)胞外使其在細(xì)胞內(nèi)的積累增加，這些特征都使得凋亡細(xì)胞經(jīng)染色后熒光會(huì)比正常細(xì)胞明顯增強(qiáng)。但細(xì)胞核熒光染料PI不能穿透細(xì)胞膜完整的正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞，即活細(xì)胞對(duì)PI染料拒染而對(duì)于壞死細(xì)胞，其細(xì)胞膜的完整性在早期即已喪失，可被PI染色。

經(jīng)上述兩種染料雙染后，使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測(cè)時(shí)，正常細(xì)胞為弱紅色熒光＋弱藍(lán)色熒光，凋亡細(xì)胞為弱紅色熒光＋強(qiáng)藍(lán)色熒光，壞死細(xì)胞為強(qiáng)紅色熒光＋弱藍(lán)色熒光。

本試劑盒染色快速方便，可用一步法或者兩步法進(jìn)行染色。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，無(wú)需稀釋等配制過(guò)程，也無(wú)需再準(zhǔn)備其它任何溶液。本試劑盒足夠檢測(cè)100個(gè)樣品，每個(gè)樣品的細(xì)胞數(shù)量可達(dá)105-106個(gè)。

注意事項(xiàng)

1) Hoechst 33342、PI對(duì)人體有害，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)；

2) Hoechst 33342、PI需避光，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程盡量避光操作；

3) 熒光染料均存在淬滅情況，建議染色后需盡快檢測(cè)；

4) Hoechst 33342 與細(xì)胞孵育時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，一般控制在20min以內(nèi)。太長(zhǎng)容易引起該染料的發(fā)射光譜由藍(lán)光向紅光遷移，導(dǎo)致紅色熒光和藍(lán)色熒光比例改變。

5) 如果用于組織樣品檢測(cè)，則必須把組織消化制備成單細(xì)胞懸浮液后才可以進(jìn)行檢測(cè)。

6) 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期12個(gè)月

Hoechst 33342/PI雙染試劑盒細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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