產品規格：100次
WST-1(粉末)1 管
電子耦合試劑 1ml
產品保存：-20℃避光保存，一年有效。WST-1 粉末溶解后，4℃避光可以保存一周，-20℃避光可以保存半年(宜適當分裝，盡量避免反復凍融)。
產品說明：
1．WST-1 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒是一種廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。
2．WST-1 是一種類似于 MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。
3．WST-1 是 MTT的一種升級替代產品，和 MTT或其它 MTT 類似產品如 XTT、MTS 等相比有明顯的優點。首先，MTT 被線粒體內的一些脫氫酶還原生成的formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而WST-1和XTT、MTS產生的formazan 都是水溶性的，可以省去后續的溶解步驟。其次，WST-1 產生的formazan 比 XTT和 MTS 產生的formazan 更易溶解。再次，WST-1 比 XTT和 MTS 更加穩定，使實驗結果更加穩定。另外，WST-1和MTT、XTT 等相比，線性范圍更寬，靈敏度更高4．本試劑盒可以用于細胞因子等誘導的細胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導的細胞毒性檢測，或一些藥物誘導的細胞生長抑制檢測等。
5．本試劑盒檢測非常便捷。無須使用同位素，所有的檢測步驟僅在同一塊 96 孔板內完成。
不必洗滌細胞，不必收集細胞，也不必采用額外步驟去溶解 formazan。可以用于大批量樣品的檢測。
6．酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。
7．WST-1 對細胞無明顯毒性。加入 WST-1 顯色后，可以在不同時間反復用酶標儀讀板，使檢測時間更加靈活，便于找到最佳測定時間。
8．本試劑盒可以測定 100 個樣品。
使用方法：
1．WST-1溶液的配制：把1ml電子耦合試劑加入到WST-1粉末中，完全溶解即成WST-1溶液。WST-1溶液4℃避光可保存一周，而不影響使用效果。短期內不使用的WST-1溶液，分裝后可以-20℃避光保存半年(盡量避免反復凍融)。凍存的WST-1溶液溶解后可能會觀察到一些沉淀物，這是正常現象，37℃水浴孵育2-10分鐘，通常可以完全溶解。
2．收集對數期細胞，調整細胞懸液濃度，每孔加入 100μl，鋪板使待測細胞調密度至1000-10000 孔，(邊緣孔用無菌 PBS 填充)。5%CO2，37℃孵育，至細胞單層鋪滿孔底(96孔平底板，具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定)。加入濃度梯度的藥物，原則上，細胞貼壁后即可加藥，或兩小時，或半天時間，每孔 0-10μl，設 3-5 個復孔.建議設 5 個。
3．每孔加入 10μl WST-1 溶液，繼續培養 4 小時。若藥物與 WST-1 能夠反應，可先離心后棄去培養液，小心用 PBS 沖 2-3 遍后，再加入含 WST-1的培養液。
4．在細胞培養箱內繼續孵育時間長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，初次實驗時可以在 0.5、1、2和 4 小時后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續實驗。
5．把 96 孔板置于搖床上搖動一分鐘，以充分混勻待檢測體系。
6．在 450nm 測定吸光度。如無 450nm 濾光片，可以使用 420-480nm的濾光片。可以使用大于 600nm的波長作為參考波長進行雙波長測定。
注意事項：
1．由于使用 96 孔板進行檢測，如果細胞培養時間較長，一定要注意蒸發的問題。一方面，由于 96 孔板周圍一圈最容易蒸發，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加 PBS，水或培養液；另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培養箱內水源的地方，以緩解蒸發。
2．使用時最好帶那種透明的簿膜手套。
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021-59541103 021-60443211
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