產(chǎn)品目錄

1．MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒被廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的實驗方法。由于細胞活力與細胞數(shù)呈正相關(guān)，因此常常用來檢測細胞的增殖情況。MTT可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成結(jié)晶狀的深紫色產(chǎn)物formazan。在特定溶劑存在的情況下，可以被完全溶解。然后通過酶標儀可以測定 570nm 波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。

2．本試劑盒采用了獨特的Formazan 溶解液配方，無需去除原有的培養(yǎng)液，可以直接加入Formazan 溶解液溶解formazan。從而避免了由于去除培養(yǎng)液時formazan 被部分去除而引起的誤差。

3．本試劑盒背景低，靈敏度高，線性范圍寬，使用方便提高了可靠性。

4．本產(chǎn)品為500次(5個96孔細胞培養(yǎng)板)操作。

注意事項：

1．由于使用 96 孔板進行檢測，如果你的細胞要養(yǎng) 48 小時或更長，建議不要吝嗇 96-孔板的四周邊孔，這 32 個邊孔不能使用，建議加入滅菌 PBS 以飽和中間 64 個孔的水分。因為細胞培養(yǎng)過程中，邊孔的水分蒸發(fā)很快，培養(yǎng)液及里面的藥物會出現(xiàn)濃縮現(xiàn)象，細胞的狀況就復雜了。2．MTT 溶劑在低溫情況下會凝固，使用前請室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

3．MTT 一般最好 4ºC 避光保存兩周內(nèi)有效，保存在-20℃長期保存，避免反復凍融，最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解，當 MTT 變?yōu)榛揖G色時就表明 MTT 已失效。

4．Formazan 溶解液結(jié)凍或產(chǎn)生沉淀時可以 37℃水浴孵育以促進溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。

5．孵育時，須避光。

6．MTT 有致癌性，用的時候小心,有條件最好帶那種透明的簿膜手套．MTT 需要無菌，MTT對菌很敏感。

使用方法：

1．收集對數(shù)期細胞，調(diào)整細胞懸液濃度，每孔加入 100μl,細胞增殖實驗每孔加入2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入5000個細胞(96孔板，具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定)。加入濃度梯度的藥物，原則上，細胞貼壁后即可加藥，每孔0-10μl，設(shè)3-5個復孔。

2．5%CO2，37℃孵育16-48 小時，置顯微鏡下觀察。

3．每孔加入10微升MTT染色液，繼續(xù)培養(yǎng)4h。若藥物與 MTT 能夠反應，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS洗2-3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。

4．每孔加入100微升Formanzan溶解液，在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)再繼續(xù)孵育。直至在普通光學顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn) formazan 全部溶解。通常 37℃孵育4小時左右，紫色結(jié)晶會全部溶解。

如果紫色結(jié)晶較小較少，溶解的時間會短一些。如果紫色結(jié)晶較大較多，溶解的時間會長一些。(也可以每孔加入 100μl的DMSO，細胞培養(yǎng)箱孵育10min左右，紫色結(jié)晶基本全部溶解，加入DMSO之前需去除細胞培養(yǎng)液)。

5．在酶聯(lián)免疫檢測儀570nm測定吸光度。如無570nm濾光片，可以使用560-600nm的濾光片。

MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒細胞生物學研究有以下幾個方面。

細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調(diào)控。
⑤細胞分化及其調(diào)控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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