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PCNA 細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒（細(xì)胞免疫熒光法/流式細(xì)胞儀檢測(cè)），PCNA是細(xì)胞DNA 多聚酶的“δ”輔助蛋白，是真核細(xì)胞DNA 合成時(shí)所必需的一種酸性核蛋白。PCNA 在細(xì)胞核內(nèi)合成，并儲(chǔ)存在核內(nèi)，細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)時(shí)，其含量很低，當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入增殖周期中，其表達(dá)明顯增加，故PCNA 的表達(dá)高低可反映細(xì)胞增殖的活躍程度。

操作方法

1. 在最適的環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)胞。

2. 除去培養(yǎng)液，用PBS 洗一次。

3. 胰蛋白酶處理和收集細(xì)胞，離心，（注意1）保證每管細(xì)胞數(shù)在106 個(gè)。

4. 用0.3 ml PBS 輕輕的重懸細(xì)胞, 然后慢慢加入0.7 ml 預(yù)冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混勻。在4°C 至少1h。（注意2）

5. 沉淀細(xì)胞，完全吸去上清。

6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗細(xì)胞2 次。

7. 用100μl 抗體孵育液（0.5% Tween-20/1%BSA/PBS）重懸細(xì)胞，加入1ul PCNA 抗體(1μg/106 cells)，室溫孵育1 小時(shí)。

8. 離心收集細(xì)胞，用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。

9. 離心收集細(xì)胞，用50μl 抗體孵育液重懸，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室溫孵育30 分鐘。離心收集細(xì)胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。

10. 用含有終濃度為10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重懸細(xì)胞。

11. 避光使細(xì)胞在室溫下孵育20min 后，離心收集細(xì)胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，轉(zhuǎn)移至流式檢測(cè)管中重懸。

12. FACS 檢測(cè)或者儲(chǔ)存于4℃。

注意事項(xiàng)

1.所有的沉淀細(xì)胞步驟為2,000 rpm, 5 min。

2.可滲透化處理細(xì)胞后細(xì)胞濃度大約為106 ，樣品可以4°C 儲(chǔ)存于乙醇中到2 個(gè)星期。

3.流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)需要設(shè)立對(duì)照試驗(yàn)：

只用PI 染細(xì)胞

只用羊抗小鼠IgG-FITC 染細(xì)胞

未染色的細(xì)胞組

PCNA細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(ICF/FACS法)細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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