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此試劑盒是用于測定細(xì)胞增殖或毒性試驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度，無放射性的比色檢測法。實(shí)驗(yàn)的靈敏度比其它如MTT, XTT 或MTS 高。由于新型細(xì)胞增殖及毒性檢測溶液相當(dāng)穩(wěn)定，并且對(duì)細(xì)胞沒有毒性，可直接加入到細(xì)胞樣品中長時(shí)間孵育。

注意事項(xiàng)

1. 本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，例如一些抗氧化劑會(huì)干擾檢測，需設(shè)法去除。

2. 如果待測溶液有還原性，測定不含細(xì)胞，但含有新型細(xì)胞增殖及毒性檢測溶液在450 nm 處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入CCK-8 檢測溶液，如果吸光度相對(duì)較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的100 μl 培養(yǎng)基和10 μl 新型細(xì)胞增殖及毒性檢測溶液進(jìn)行檢測。

3. 用酶標(biāo)儀檢測前請(qǐng)確保孔內(nèi)沒有氣泡，否則會(huì)干擾測定。

4. 為保證您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

操作方法

1. 96 孔板加入細(xì)胞100μL/孔（約1×104），置37℃ 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 小時(shí)。2.加入適當(dāng)濃度的受試化合物。3.將96 孔板在37℃，含5% CO2 空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4. 向各孔中加入10 μl 的新型細(xì)胞增殖及毒性檢測溶液。

5. 37℃下孵育1～4 小時(shí)。

6. 酶標(biāo)儀在450nm 波長處檢測每孔的光密度。

結(jié)果分析

1. 細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（完全培養(yǎng)基加新型細(xì)胞增殖及毒性檢測溶液，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（完全培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加新型細(xì)胞增殖及毒性檢測溶液，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

2. 求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)。

CCK-8法細(xì)胞增殖檢測試劑盒細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面。

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括。
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究。
②生物膜與細(xì)胞器的研究。
③細(xì)胞骨架體系的研究。
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控。
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控。
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化。
⑧細(xì)胞工程。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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