本試劑盒是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中caspase 6酶活性或純化的caspase 6酶活性的試劑盒。本試劑盒用酶標儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測時,除標準曲線外可以檢測20個樣品。
Caspase是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 6也稱Mch-2,有時被寫作caspase-6或caspase 6,最初從人的Jurkat細胞中被發現。Caspase 6的前體被granzyme B剪切后可以形成活化的caspase 6二聚體,而活化的caspase 6被發現可以誘導細胞凋亡。Caspase 6可以剪切PARP和keratin-18,也可以剪切細胞核核被膜上的關鍵組成蛋白Lamin A。Caspase家族中僅caspase 6可以剪切Lamin A。Caspase 6對于Lamin A的識別位點是VEID。本試劑盒利用了caspase 6對于VEID識別的特異性,設計了相應的caspase 6特異的顯色底物Ac-VEID-pNA。
本Caspase 6活性檢測試劑盒是基于caspase 6可以催化底物Ac-VEID-pNA(acetyl-Val-Glu-Ilel-Asp p-nitroanilide)產生黃色的pNA(p-nitroaniline),從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 6的活性。pNA在405nm附近有強吸收。
試劑盒中提供了caspase 6催化產生的黃色產物pNA,可以作為定量caspase 6酶活性的標準品。
試劑盒組分:
裂解液——————8ml
檢測緩沖液——————8ml
Ac-VEID-pNA(2mM)———200μl
pNA(10mM)——————200μl
注意事項:
1. 須自備可以測定A405或A400的酶標儀或容量不超過100μl的分光光度檢測杯及相應分光光度計。優先考慮測定A405,如有困難可以測定A400。
2. Ac-VEID-pNA需盡量避免反復凍融,請注意適當分裝。
3. 測定蛋白濃度需Bradford蛋白濃度測定試劑盒(YT034),可向百奧萊博訂購。建議樣品用水稀釋1倍后再用Bradford法測定蛋白濃度,以降低DTT對蛋白濃度測定的干擾。
4. pNA(中文名為4-硝基苯胺)有毒,請注意小心防護。pNA(10mM)在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
5. 本試劑盒的裂解液可以和百奧萊博的其它caspase活性檢測試劑盒的裂解液通用,即本試劑盒裂解液制備的蛋白樣品可以用于百奧萊博其它caspase活性檢測試劑盒的檢測。
儲存條件:-20℃。
Caspase 6 活性檢測試劑盒細胞生物學研究有以下幾個方面。
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調控。
⑤細胞分化及其調控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。
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