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本試劑盒是用FITC標記的重組人Annexin V來檢測細胞凋亡時出現在細胞膜表面的磷脂酰絲氨酸的一種細胞凋亡檢測試劑盒。可以使用流式細胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設備進行檢測。一個包裝的本試劑盒共可以檢測20個細胞樣品。
試劑盒組份：
Annexin V-FITC——————100µl
Annexin V-FITC結合液———12ml
碘化丙啶染色液——————220µl
Annexin是一類廣泛分布于真核細胞細胞漿內鈣離子依賴的磷脂結合蛋白，參與細胞內的信號轉導。但僅Annexin V被報道可以調控一些PKC的活性。
Annexin V選擇性結合磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱PS)。磷脂酰絲氨酸主要分布在細胞膜內側，即與細胞漿相鄰的一側。在細胞發生凋亡的早期，不同類型的細胞都會把磷脂酰絲氨酸外翻到細胞表面，即細胞膜外側。磷脂酰絲氨酸暴露到細胞表面后會促進凝血和炎癥反應。而Annexin V和外翻到細胞表面的磷脂酰絲氨酸結合后可以阻斷磷脂酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應活性。
用帶有綠色熒光的熒光探針FITC標記的Annexin V，即Annexin V-FITC，就可以用流式細胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷脂酰絲氨酸的外翻這一細胞凋亡的重要特征。
本試劑盒還提供了碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液，碘化丙啶可以染色壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞，呈現紅色熒光。對于壞死細胞，由于細胞膜的完整性已經喪失，Annexin V-FITC可以進入到細胞漿內，與位于細胞膜內側的磷脂酰絲氨酸結合，從而也使壞死細胞呈現綠色熒光。
1.細胞用本試劑盒染色后流式細胞儀檢測細胞凋亡的效果圖。Jurkat細胞未經處理(A)或用10μM喜樹堿(Camptothecin)作用4小時(B)后，用本試劑盒染色，然后用流式細胞儀進行細胞的散射和熒光檢測。從圖中可以看出，經過凋亡誘導劑喜樹堿處理后的細胞，其Annexin V-FITC染色陽性并且PI染色陰性的細胞，即凋亡細胞，明顯增加(B圖的右下象限)，Annexin V-FITC和PI染色雙陽性的細胞，即壞死細胞，也有所增加(B圖的右上象限)。圖中Annexin V-FITC染色陰性PI染色陽性(Annexin V-/PI+)所在象限(A和B圖的左上象限)出現的細胞點是許可范圍內的檢測誤差。
圖2.細胞用本試劑盒染色后流式細胞儀檢測效果驗證圖。Jurkat細胞用10μM喜樹堿(Camptothecin)作用4小時后，未經染色(A)、僅用本試劑盒中的PI進行染色(B)、僅用本試劑盒中的Annexin V-FITC進行染色(C)、用本試劑盒中的Annexin V-FITC和PI進行雙染(D)。從圖中可以看出，未經染色的是雙陰性細胞(A)，僅PI染色后出現了預期的PI染色陽性的細胞，僅Annexin V-FITC染色出現了預期的Annexin V-FITC染色陽性的細胞，Annexin V-FITC和PI雙染出現了預期的僅Annexin V-FITC染色陽性的凋亡細胞和雙陽性的壞死細胞。出現的非預期的細胞點完全在許可的誤差范圍內。實測數據可能會因細胞類型、細胞凋亡情況、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數據僅供參考。
注意事項：
1. 如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
2. 染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
3. 如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
4. 熒光物質均易發生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
5. 用于流式細胞儀檢測時，如果發現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞，并且通過調整相關設置和參數也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
儲存條件：4℃避光，有效期6個月。

Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒細胞生物學研究有以下幾個方面。

細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括。
①細胞核、染色體以及基因表達的研究。
②生物膜與細胞器的研究。
③細胞骨架體系的研究。
④細胞增殖及其調控。
⑤細胞分化及其調控。
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)。
⑦細胞的起源與進化。
⑧細胞工程。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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