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Rosetta(DE3) 感受態細胞

  • 產品貨號：CS-G062
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：進口、國產
  • 包裝類型:瓶裝
  • 采購熱度：787
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：細胞
  • 含量：
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內容：Rosetta(DE3) 感受態細胞現貨供應，公司產品僅用于科研

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標簽:Rosetta(DE3) 感受態細胞廠家 Rosetta(DE3) 感受態細胞說明書 

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以下是感受態細胞的訂購信息：
產品名稱 Rosetta(DE3) 感受態細胞
規格1 100ul*10
規格2 100ul*50
使用說明：
1． 取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。
2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。
3． 42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。
4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床， 150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。
5． 根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12~16h。

Rosetta(DE3) 感受態細胞培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

Rosetta(DE3) 感受態細胞操作方法  
1.0.2cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發，待乙醇揮發干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。  
2.取-80℃保存的農桿菌感受態插入冰中5分鐘，待其融化，加入1-5ug質粒DNA（質粒體積不大于6ul，最好用試劑盒抽提，雙蒸水溶解），用手撥打管底混勻，立即插入冰中，用200ul槍頭將感受態-質粒混合物快速移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用。  
3.啟動電轉儀，設置參數：C=25uF，PC=200ohm，V=2400V（此參數為Biorad推薦，使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中，加入700ul無抗生素的LB并轉移到感受態空管中，28℃振蕩培養2~3小時。  
4.6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養箱培養2-3天（當平板只含有50ug/mlkan時，28℃培養48h即可；平板中同時加入50ug/mlkan，20ug/mlrif時，需28℃培養60h；如果使用的平板含有50ug/mlrif則需要28℃培養72-90h）。 

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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1、報價含普票、運費。

 

2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發貨。

  

3、進口原裝產品要3-6周的貨期，詳細情況請咨詢客服。

  

4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

  

5、如需代為檢測，標本對環境溫度高，可聯系客服安排專人取樣（限省內客戶）。

  

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賬 戶 名：上海生物

 

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