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PCR-熒光探針法兩種計算方法

閱讀：1152     發布時間：2019/12/27 16:41:51

           PCR-熒光探針法基本原理：通過大量對比某一種細菌或病毒的基因，得到該細菌或病毒共同保守序列，根據該序列設計特異性引物，通過PCR擴增，即可獲得相應大小的片段，以此來檢測該細菌或者病毒的感染/污染狀態。
PCR-熒光探針法用RQ作統計量和△CT作統計量都是可以的，外文中使用這兩種方法的都不少。
       而且我實際計算過，實際上這兩種方法算出來的有無統計學意義應該是相同的，但是注意P值會不同。
這其實問題不大，但是實際上，如果用△CT作統計量，基本很多時候它都是正態的，則需要使用參數檢驗，并且標準差小，這樣有個好處就是如果是陰性結果的話，統計效能計算起來偏大。而如果用RQ作統計量，基本RQ大多都是非正態分布，并且標準差大，這樣如果陰性結果的話，統計效能值與△CT法比會偏小，這樣就很吃虧當需要解釋統計效能時。
      PCR-熒光探針法其次，如果是用RQ值做統計量，則在一張圖中，無法同時顯示多個基因的相對表達量。除非比如說你的B基因的RQ值計算還是以某一樣本A基因作為Calibrator sample，雖然理論上用誰做統計結果都應該一樣，但是說起來不好說，別人會問憑什么B基因用A基因的△CT值作歸一。而是用△CT法則不牽扯到這個問題，因為大家都是和內參減的，可以直接多組比較并且放在圖中。
      因此我的感覺，只要是△CT法肯定被認可，則用△CT法是zui簡單且zui方便的方法。但是從本質講RQ值法更本質，因為△CT只是用來比較的，而不能代替原來自身的表達量，而RQ是2-△△CT，這其實才反應了樣本檢測基因的表達量，因為大家懂的，CT值是與拷貝數的對數存在線性關系。
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