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血漿游離血紅蛋白測定實驗原理

閱讀：11     發布時間：2024/11/5 11:58:40

     血紅蛋白具有類過氧化物酶活性，可催化H2O2釋放新生態氧，使鄰甲聯苯胺氧化發生顏色變化，由無色zui終變為藍紫色。根據顯色深淺與標準進行比較，可測出其含量。在血漿游離血紅蛋白測定實驗中，這一化學反應是定量檢測的關鍵步驟。當血紅蛋白存在時，它如同一個微小的催化劑，促使過氧化氫（H2O2）分解，釋放出活潑的氧分子。這些氧分子隨即與鄰甲聯苯胺分子發生氧化反應，導致后者結構改變，顏色也隨之逐步加深，從初始的無色狀態，經過一系列中間色調，最終定格為鮮明的藍紫色。
 
    實驗過程中，精確控制反應條件至關重要。溫度、pH值以及反應時間等因素，均可影響酶活性及化學反應速率，進而影響顏色變化的程度和穩定性。因此，實驗者需嚴格遵守操作規程，確保每一步驟都在最適條件下進行，以獲得準確可靠的結果。
實驗方法
 
材料：
 
　　1．2g/L鄰甲聯苯胺溶液                                                                
 
　　2．1%H2O2
 
　　3．10%醋酸溶液
 
　　4．分光光度計
                                                             
　　
方法：
 
　　1.抽取靜脈血2-3ml，*抗凝，離心分離血漿。
       2．按下表進行操作，用分光光度計，波長為530nm，以空白管調零，測定測定管的吸光度。
                                                                                           
　　為了準確測定血漿中游離血紅蛋白的含量，通常還需制備一系列已知濃度的血紅蛋白標準溶液，并與待測樣本同時進行上述化學反應。通過比較樣本與標準品的顏色深淺，利用比色法或分光光度法等手段，可建立顏色強度與血紅蛋白濃度之間的線性關系，從而推算出樣本中游離血紅蛋白的具體含量。
 
   此方法不僅靈敏度高，而且操作簡便，是臨床檢驗中常用的手段之一，對于診斷溶血性貧血、血管內溶血等病理狀態具有重要意義，為醫生的診斷與治療提供了有力的實驗室依據。
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