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ELISA標(biāo)本的采取和保存標(biāo)本的采取和保存

閱讀：118     發(fā)布時間：2024/9/25 14:13:13

      可用作ELISA測定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定（如血清、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢驗中均以血清作為檢測標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。

                        
     血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應(yīng)注意無菌操作，也可加入適當(dāng)防腐劑。此外，對于需要長期儲存的ELISA標(biāo)本，尤其是那些用于科研或回顧性分析的珍貴樣本，更應(yīng)嚴(yán)格遵循高標(biāo)準(zhǔn)保存流程。除了基本的低溫保存外，還可考慮使用液氮進(jìn)行超低溫（-196°C）冷凍，以最大限度地減緩樣本中生物分子的降解速度，確保數(shù)據(jù)的長期穩(wěn)定性和可靠性。

      在樣本標(biāo)記與記錄方面，每份標(biāo)本都應(yīng)附有詳細(xì)的標(biāo)簽，包括采集日期、患者信息（匿名處理以保護隱私）、樣本類型、處理過程及任何特殊情況說明。同時，建立電子化的樣本管理系統(tǒng)，便于追蹤樣本的存儲位置、檢測狀態(tài)及剩余量，提升管理效率。
                      
      對于ELISA實驗前的樣本預(yù)處理，特別是那些需要特殊處理的樣本（如高黏度或含有大量顆粒物的樣本），可嘗試采用離心、過濾或稀釋等方法，以去除雜質(zhì)，減少非特異性反應(yīng)，提高檢測準(zhǔn)確性。此外，對于可能含有酶抑制劑或激活劑的樣本，需根據(jù)具體情況進(jìn)行預(yù)處理，以消除其對ELISA反應(yīng)體系的影響。

      最后，無論是直接測定還是預(yù)處理后的樣本，在加入ELISA反應(yīng)板前都應(yīng)進(jìn)行充分的混勻，確保樣本中各成分分布均勻，避免局部濃度過高導(dǎo)致的假陽性或假陰性結(jié)果。同時，嚴(yán)格控制實驗條件，如溫度、時間、pH值等，確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。通過這些細(xì)致入微的操作，ELISA標(biāo)本的采取和保存將更加科學(xué)、規(guī)范，為臨床診斷和科學(xué)研究提供堅實的數(shù)據(jù)支持。
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