由于RNA的種類來源很多,因而提取制備方法各異,一般有苯酚法,去污劑法和鹽酸胍法,其中苯酚法實驗室最常用。組織勻漿后用苯酚處理離心,RNA即溶于上層被酚飽和的水相中,向水相加冷乙醇后, RNA即以白色絮狀沉淀析出。此法較好除去DNA和蛋白質,且獲得生物活性的RNA。
單細胞裂解液 (RNA)實驗步驟 1. 對于單層培奍細胞
(1)每10 cm 培養皿培養的細胞,用冰冷PBS洗滌3次。
(2)每次1 ml 然后用小體積PBS刮下細胞,轉移至冰浴的離心管中。
(3)300 g 離心5 min,棄上清,繼續冰浴。
2. 對于懸浮培養細胞
(1)300 g 離心5 min,棄上請。
(2)細胞以1/2原體積的冰冷重懸,再離心后棄上清。
3. 重懸細胞于375 μl 冰冷的細胞裂解緩沖液,并置冰浴5 min。
4. 于4℃在微量離心機中離心2 min,將上清移至一個潔凈的已加有5 μl 20%SDS的管中,立即在旋渦混合器上振蕩。
5. 加入2.5 μl 20 mg/ml 蛋白酶K,37℃溫育15 min。
6. 加入400 μl 酚/氯仿/異戊醇抽提,在旋渦混合器上振蕩用微量離心機離心,上清移至干凈的離心管中,重復抽提1遍。
7. 再以400 μl 氯仿/異戊醇抽棰,上層水相轉移至干凈的離心管中。
8. 加入40 μl 3 mol/l 乙酸鈉緩沖液(pH7.5),再加無水乙醇,混勻后在干冰/乙醇中沉淀15~30 min或-20℃過夜。
9. 用微量離心機4℃離心15 min 加人1 ml 75%乙醇/25% 0.1 mol/l乙酸鈉(pH5.2)冼滌沉淀。
10. 干燥后用100 μl 處理過的水重溶沉淀,取10 μl RNA稀釋于1 ml 水中,測A280和A260,其與的RNA可在-70℃貯存。
實驗步驟
1. 對于單層培奍細胞
(1)每10 cm 培養皿培養的細胞,用冰冷PBS洗滌3次。
(2)每次1 ml 然后用小體積PBS刮下細胞,轉移至冰浴的離心管中。
(3)300 g 離心5 min,棄上清,繼續冰浴。
2. 對于懸浮培養細胞
(1)300 g 離心5 min,棄上請。
(2)細胞以1/2原體積的冰冷重懸,再離心后棄上清。
3. 重懸細胞于375 μl 冰冷的細胞裂解緩沖液,并置冰浴5 min。
4. 于4℃在微量離心機中離心2 min,將上清移至一個潔凈的已加有5 μl 20%SDS的管中,立即在旋渦混合器上振蕩。
5. 加入2.5 μl 20 mg/ml 蛋白酶K,37℃溫育15 min。
6. 加入400 μl 酚/氯仿/異戊醇抽提,在旋渦混合器上振蕩用微量離心機離心,上清移至干凈的離心管中,重復抽提1遍。
7. 再以400 μl 氯仿/異戊醇抽棰,上層水相轉移至干凈的離心管中。
8. 加入40 μl 3 mol/l 乙酸鈉緩沖液(pH7.5),再加無水乙醇,混勻后在干冰/乙醇中沉淀15~30 min或-20℃過夜。
9. 用微量離心機4℃離心15 min 加人1 ml 75%乙醇/25% 0.1 mol/l乙酸鈉(pH5.2)冼滌沉淀。
10. 干燥后用100 μl 處理過的水重溶沉淀,取10 μl RNA稀釋于1 ml 水中,測A280和A260,其與的RNA可在-70℃貯存。鈉(Na)測試盒(帶標準)
氯(Cl)測試盒(帶標準)
鈣(Ca)測試盒(帶標準)
磷(Pi)測試盒(帶標準)
谷丙轉氨酶(SGPT)測試盒
谷草轉氨酶(SGOT)測試盒
總膽紅素、直接膽紅素測試盒
γ-谷氨酰轉移酶(γ-GT)測試盒
尿膽紅素測試盒
尿膽原測試盒
尿素氮(BUN)測試盒