HCT-8/VCR人結(jié)腸癌長春新堿耐藥細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，*將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織完全被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗（Abbioscience公司），然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，*在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。AKT1蛋白激酶B
ANGL2血管生成素樣蛋白2抗體
Angiopoietin 4血管生成素3/血管生成素4抗體
Annexin I膜粘連蛋白 I抗體
Annexin A2膜粘連蛋白 Ⅱ抗體
ATF1活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體
Aquaporin 4 水通道蛋白4抗體
ATF2活化復(fù)制因子2抗體
AMPK beta 1腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體
Amylin糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體
Angiotensin II血管緊張素Ⅱ抗體
AT2R血管緊張素Ⅱ受體1抗體
Angiopoietin-1血管生成素-1抗體
Annexin V膜粘連蛋白5抗體
Annexin V重組膜粘連蛋白5抗體
alpha Adaptin銜接蛋白α-Adaptin抗體
APAF1(CT)凋亡蛋白活性因子-1抗體（C端）
APAF1(NT)凋亡蛋白活性因子-1抗體（N端）
ABCG2三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體
APOE載脂蛋白E抗體
Amyloid Precursor Protein淀粉樣肽前體蛋白抗體
Aquaporin 2水通道蛋白-2抗體
AGT血管緊張素原抗體
Androgen receptor雄激素受體抗體
AVEN細(xì)胞死亡調(diào)節(jié)蛋白抗體(凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制劑)
13585831301
021-59541103 021-60443211
3004967995
關(guān)于莼試
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