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細胞毒性檢測試劑盒（乳酸脫氫酶法）使用方法

閱讀：709     發布時間：2021/4/19 16:10:11

細胞毒性檢測試劑盒(乳酸脫氫酶法)使用方法：
 
一、樣品的準備：
方法一：LDH釋放檢測
a.根據細胞的大小和生長速度將適量細胞接種到96孔細胞培養板中，使待檢測時細胞密度不超過80-90%滿。
b.吸去培養液，用PBS液洗滌一次。換新鮮培養液(推薦使用含1%血清的低血清培養液或適當的無血清培養液)，將各培養孔分成如下幾組：包括無細胞的培養液孔(背景空白對照孔)，未經藥物處理的對照細胞孔(樣品對照孔)，未經藥物處理的用于后續裂解的細胞孔(樣品最大酶活性對照孔)，以及藥物處理的細胞孔(藥物處理樣品孔)，并做好標記。按照實驗需要給予適當藥物處理(如加入0-10μl左右特定的藥物刺激，可設置不同濃度，不同處理時間，對照孔中需加入適當的藥物溶劑對照)，繼續按常規培養。到預定的檢測時間點前1小時，從細胞培養箱里取出細胞培養板，在“樣品最大酶活性對照孔”中加入試劑盒提供的LDH釋放試劑，加入量為原有培養液體積的10%。加入LDH釋放試劑后，反復吹打數次混勻，然后繼續在細胞培養箱中孵育。
c.到達預定時間后，將細胞培養板用多孔板離心機400g離心5min。分別取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相應孔中，隨即進行樣品測定。
方法二：細胞內總LDH的檢測
a.細胞毒性檢測：根據細胞的大小和生長速度將適量細胞接種到96孔細胞培養孔板中，使待檢測時細胞密度不超過80-90%滿。加入不同藥物進行處理，并設置適當對照。藥物刺激完畢后，將細胞培養板用多孔板離心機400g離心5min。盡量吸除上清，加入150μl 用PBS稀釋了10倍的試劑盒提供的LDH釋放試劑(10體積PBS中加入1體積LDH釋放試劑并混勻)，適當搖晃培養板混勻，然后繼續在細胞培養箱中孵育1小時。隨后將細胞培養板用多孔板離心機400g離心5min。分別取各孔的上清液120μl，加入到一新的96孔板相應孔中，隨即進行樣品測定。
b.細胞增殖檢測：根據細胞的大小和生長速度將適量細胞接種到96孔細胞培養孔板中，使促進細胞增殖的藥物刺激后細胞不超過80-90%滿為宜。使用不同的藥物刺激細胞，并設置適當對照。藥物刺激完畢后，將細胞培養板用多孔板離心機400g離心5min。盡量吸除上清，加入150μl 用PBS稀釋了10倍的試劑盒提供的LDH釋放試劑(10體積PBS中加入1體積LDH釋放試劑并混勻)，適當搖晃混勻，然后繼續在細胞培養箱中孵育1小時。隨后將細胞培養板用多孔板離心機400g離心5min。分別取各孔上清液120μl，加入到一新的96孔板相應孔中，隨即進行樣品測定。
  注：LDH釋放檢測更加常用一些，細胞內總LDH檢測通常可以使用MTT、WST-1或CCK-8等方法替代。
 
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