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小鼠4-羥基壬烯酸HNE酶聯檢測試劑盒測定步驟

閱讀：666     發布時間：2020/9/10 16:21:12

      本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠4-羥基壬烯酸（4-HNE）水平。用純化的小鼠4-羥基壬烯酸（4-HNE）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入4-羥基壬烯酸（4-HNE），再與HRP標記的4-羥基壬烯酸（4-HNE）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的4-羥基壬烯酸（4-HNE）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠4-羥基壬烯酸（4-HNE）濃度。 
小鼠4-羥基壬烯酸HNE酶聯檢測試劑盒測定步驟
1.加樣
 1. 除包被外都需45度加樣
 2.加樣體積要準確
 3.管底加樣，不能加在管壁上
 4.加樣時不能產生氣泡
2.溫浴 
 1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱。
 2.各ELISA板不應疊在一起。
 3.為避免蒸發，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。
 4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。
3.洗滌 
 1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關鍵。
 2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。
4.讀板 
 1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。
 2.如用酶標儀測定結果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。
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