雞貧血病毒PCR檢測試劑盒反應(yīng)的特異性決定因素為
1.引物與模板DNA特異正確的結(jié)合。
2.堿基配對原則。
3. Tag DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性。
4.靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及 Tag DNA聚合醇耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大増加加,被擴増的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
靈敏度高
雞貧血病毒PCR檢測試劑盒PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式増加的,能將皮克(pg=10-129)量級的起始待測模板擴増到微克(ug=10-69)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zu小檢出率為3個細(xì)菌。
(3)簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的 Tag DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴増液和水浴鍋上進行變性退火-延伸反應(yīng),一般在2-4小時完成擴増反應(yīng)。擴増產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4)對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA粗制品及總RNA均可作為擴増模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
組成及試劑配制:
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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021-59541103 021-60443211
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![人胚腎細(xì)胞；293 [HEK-293]](http://img5.zhihuilv.com/223/Products/Small/20190314/201903141023106619.jpg)
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