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人眼小梁網細胞細胞培養方法及操作步驟

閱讀：696     發布時間：2020/6/4 10:48:49

人眼小梁網細胞細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
棄去培養上清，用pbs或生理鹽水清洗1-2次；
加入2ml0.25%胰酶t25瓶，使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
將細胞懸液1000rpm左右條件下離心4min，棄上清；
用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，t25培養瓶加6-8ml培養基；
懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、人眼小梁網細胞細胞細胞復蘇：
將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
在1000rpm左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
棄去培養上清，用pbs或生理鹽水清洗1-2次，加入1ml 0.25%胰蛋白酶t25瓶
1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；
將細胞懸液1000rpm左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
人眼小梁網細胞細胞培養操作步驟 ：
 
1．用蓋片鑷將蓋，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板每孔一片或培養皿中每個平皿可放置2-3片； 
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時； 
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片完全浸在培養液中； 
5．將培養板在5% co2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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