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技術服務

細胞懸浮培養幾點注意事項操作步驟

閱讀：4564     發布時間：2019/10/9 14:11:42

操作步驟
1．配制培養基
(1) 用于誘導水稻愈傷組織的培養基(N6)，見表4－1。
(2) 用于水稻懸浮培養的液體培養基，見表4－2。
按照培養基配方取各種藥品，zui后用蒸餾水定容到所需體積。所配制的培養基經高壓蒸汽滅菌后備用，固體瓊脂培養基分裝在250mL 的錐形瓶內，每瓶約分裝30mL。
2．水稻種子的消毒
（1）將種子置于無菌的培養皿內，以體積分數95％的酒精消毒1～2min。
（2）取出后用無菌水沖洗2～3 遍。
（3）將種子放入25.0g/L 的次氯酸鈉溶液中輕輕搖動后，浸泡60min 。
（4）取出后用無菌水沖洗，將次氯酸鈉溶液充分洗凈。
3．懸浮培養的開始：
當得到愈傷組織后，將其轉人到AA 液體培養基中。注意愈傷組織塊應小于3mm . 若組織塊較大可用無菌解剖刀將其分割成小塊。液體培養基分裝在250mL 的錐形瓶內．接種完畢后將瓶口用封口膜封好，把培養瓶放到恒溫搖床上進行震蕩培養。調整搖床的旋轉速度，使之為120r/min。培養溫度為26℃，在黑暗中培養。
4. 接種
在超凈工作臺內，將滅菌后的水稻種子接到誘導愈傷組織的固體培養基上，每個培養瓶接5～10 粒種子。接種完畢后用封口膜將培養瓶封好，放在26℃的恒溫培養箱中進行黑暗培養。
表4－1 用于誘導水稻愈傷組織的培養基
 
表4－2 用于水稻懸浮培養的液體培養基
植物細胞懸浮培養
5．懸浮培養物的保持
進行懸浮培養后要不斷進行觀察，由于培養物的繼代培養與培養瓶內培養物的密度及細胞生長速度有關，因此當發現培養瓶中培養物密度較大時，應及時用無菌的吸管吸取部分培養物到一新的50mL 培養基中繼續培養。同時還要及時淘汰一些大的組織團塊和黃褐色的壞死組織。一般每隔4～7d 就要繼代一次。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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