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加藥實驗過程中對CCK-8測定的影響

閱讀：78     發布時間：2024/10/6 13:24:57

加藥實驗過程中對CCK-8測定的影響：

（1）注意如果藥物具有還原性,會和CCK-8發生顯色反應,增加吸光度。

（2）藥物中的金屬對CCK-8顯色有影響:當終濃度為1mM的氯化亞鉛、氧化鐵、硫酸銅會抑制5%,15%, 90%的顯色反應,使靈敏度降級。如果終濃度是10mM的話，將會100%抑制。

解決辦法

首先要確認藥物是否有吸收,在含有藥物的培養基中加入CCK-8,測定450nm的吸光度,如果它的吸光度比不含藥物的培養基(加CCK-8)的吸光度高,則證明藥物有影響,可在加CCK-8之前更換培養基,去掉藥物的影響。

（3）由于培養基中可能含有氧化還原反應的物質,在正式實驗之前,建議使用一個孔作一下檢測,有必要先確認培養基和CCK-8是否反應。一般正常的0D值應該在0.4以下。

 空白對照

在不含細胞的培養基中加入CCK-8,培養一定的時間,測定450nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗(細胞毒性實驗)時,還應考慮藥物的吸收,可在不含細胞,加入藥物的培養基中加入CCK-8,培養一定的時間,測定450nm的吸光度作為空白對照。

靈敏度影響

（1）對于不同的細胞，靈敏度不一樣，懸浮細胞較貼壁細胞難染色。

（2）對于貼壁細胞,一般加入CCK-8培養1-4小時吸光度已經很高，但對于懸浮細胞則可能吸光度較低，可以通過延長CCK-8的加入時間或增加細胞數量來解決。

細胞黏附性

（1）以層粘連蛋白(Ln)包被96孔板,通過計算不同時間點孔板中貼壁細胞的數量反映細胞的黏附性。

（2）細胞的黏附性越強,則單位時間內貼于鋪有Ln板底的細胞數量越多，去除尚未貼壁的細胞后，應用CCK-8等方法計量細胞數量便可間接反映不同細胞或不同處理的細胞黏附能力的差異。

藥物濃度檢測

將細胞培養后按照不同濃度的藥物處理-定時間后進行CCK-8檢測，根據吸光度繪制曲線,計算該藥物抑制細胞數量一半時的濃度(IC50)。

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原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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